[发明专利]术中快速鉴别肺癌和硬化性肺细胞瘤的免疫组化试剂盒

说明书

本发明涉及一种术中快速鉴别肺癌和硬化性肺细胞瘤的免疫组化试剂盒，包含冰冻固定液、过氧化物酶封闭剂、CK广(AE1/AE3)抗体、P40抗体、TTF1抗体、VIM抗体、酶标羊抗鼠/兔多聚物、DAB显色底物、DAB显色缓冲液、苏木素复染液以及清洗缓冲液，并提供上述免疫组化检测试剂盒的使用方法。本发明提供的试剂盒，通过对术中冰冻切片的快速免疫组化染色，使用CK广、VIM、TTF1、p40检测指标辅助区分硬化性肺细胞瘤和肺癌，将术中病理判断依据从单一的形态学HE染色，增加到免疫组织化学和形态学相结合，为病理医师提供更全面可靠的诊断依据，从而提高诊断准确率，降低误诊、漏诊率。

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体涉及一种术中快速鉴别肺癌和硬化性肺细胞瘤的免疫组化试剂盒。

背景技术

目前术中活检主要方法是术中冰冻切片HE染色，冰冻切片即术中快速冰冻切片，其优点是检查快速，病理工作者将手术医生术中切除的病变组织，在冰冻切片机中迅速冷冻后制成组织切片，经过快速苏木素伊红染色，由病理医生即时在显微镜下观察，短时间做出判断，整个过程一般需要在半小时内完成，而石蜡切片经过中性缓冲福尔马林固定、石蜡包埋一般需要2～3天才能完成。但由于HE染色判断仅依赖于形态学证据，组织在冰冻过程中不可避免地形成结晶，细胞形态表现质量较差，造成细胞变形，发生人为假象，加上冰冻切片取材有限，更增加了诊断难度，存在误诊的可能。在肺部肿物术中冰冻诊断中，硬化性肺细胞瘤组织形态多样，临床和影像学易误诊为癌，文献报道硬化性肺细胞瘤术中冰冻诊断准确率低至37.7％。

冰冻诊断正确与否与临床医生和病理医生的取材部位、组织大小及数量关系甚为重要，仅靠常规取材方法制作一张冰冻切片往往不能反映肿瘤的全貌。当多种形态混合在一起时更易与癌混淆，其术中鉴别诊断难度大，极易造成误诊、漏诊、过度诊断，对患者身心造成负担。因此提高术中冰冻诊断的准确率十分必要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种术中快速鉴别肺癌和硬化性肺细胞瘤的免疫组化试剂盒，该试剂盒能够用于肺肿物切除术中肺癌和硬化性肺细胞瘤的快速鉴别诊断，为病理医师提供更全面可靠的诊断依据，提高硬化性肺细胞瘤术中冰冻诊断准确率。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供一种术中快速鉴别肺癌和硬化性肺细胞瘤的免疫组化试剂盒，包括冰冻固定液、过氧化物酶封闭剂、一抗试剂、二抗试、DAB显色底物、DAB显色缓冲液、苏木素复染液以及清洗缓冲液，其中，一抗试剂包括CK广(AE1/AE3)抗体工作液、P40抗体工作液、TTF1抗体工作液和VIM抗体工作液；二抗试剂为酶标羊抗鼠/兔多聚物。

优选的，所述清洗缓冲液为10×TBSB缓冲液，配置方法如下：48.4g tris、90g氯化钠、10g Brij-35加入800mL蒸馏水中，溶解混匀，调节PH到7.5，定容至1L。

优选的，所述冰冻固定液为丙酮，较其他固定液可更好的保存细胞上的抗原。同时以福尔马林为主要成分的固定液及其衍生固定液，如AAF液、EAF液、B-5固定液、B-5固定液等，均适用于该试剂盒。

优选的，所述过氧化物酶封闭剂为浓度为3.0％-3.5％的过氧化氢溶液。

优选的，所述一抗试剂每毫升添加0.5-1％的曲拉通100，曲拉通100购自阿拉丁。

优选的，所述一抗试剂为一抗抗体浓缩液稀释制备成的一抗工作液，所述一抗抗体浓缩液购自河南赛诺特生物技术有限公司，CK广(AE1/AE3)抗体，货号：CCM0960、P40抗体，货号：CPM0133、TTF1抗体，货号：CTM0261、VIM抗体，货号：CVM0040。

优选的，所述酶标羊抗鼠/兔多聚物购于河南赛诺特生物技术有限公司，货号：SN109040。