[发明专利]一种丝瓜内参基因UBQ的引物及应用

说明书

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种丝瓜内参基因UBQ的引物及应用。本发明以内参基因UBQ的核苷酸序列为基础，设计出一对荧光定量特异引物如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2所示。利用BestKeeper，GeNorm，NormFinder和RefFinder分析软件和Delta Ct法对UBQ基因的稳定性进行评价，内参基因UBQ在盐胁迫条件下最稳定。本发明所设计的实时荧光定量PCR引物特异性强，具有很高稳定性、可靠性和重复性，为丝瓜盐胁迫下相关功能基因的精确定量提供有力支持，提高了研究的稳定性、重复性和可靠性。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种丝瓜内参基因UBQ的引物及应用。

背景技术

丝瓜(Luffa cylindrica.L)是中国重要的夏季蔬菜之一，具有营养价值高、适应性广、耐热、耐湿、抗逆性强等优点，同时兼具药用功能，因此，种植丝瓜具有很大的商业价值和巨大的市场潜力。然而，在栽培过程中丝瓜植株时常会受到多种逆境胁迫的影响。因此，提高植株自身对逆境胁迫的抗逆性是丝瓜育种工作的重要目标之一。

随着分子生物学研究的不断发展，功能基因研究已成为植物抗逆育种的重要手段，基因表达分析则是植物功能基因研究的基础。为了避免不同样本初始模板量、RNA提取、酶促反应等背景误差，通常在基因表达分析中需要利用内参基因进行数据校正和标准化。理想的内参基因应该在不同组织类型、不同生长阶段及不同环境条件下保持表达水平恒定。然而，近来的研究表明，适用于所有不同试验条件的内参基因并不存在。若只选取一种内参基因作为通用的内参基因，可能造成定量不准确甚至出现错误的实验结果。因此，根据实验条件和实验材料筛选合适的内参基因，已成为应用实时荧光定量PCR进行基因组功能分析的重要前提。

目前，丝瓜的内参基因仅有18Sr RNA基因，其它内参基因的克隆及内参基因稳定性筛选的研究未见报道，因此，在丝瓜盐胁迫基因表达研究中尚缺合适的内参基因。本发明通过从前人的研究中获得内参基因UBQ，利用BestKeeper，GeNorm，NormFinder和RefFinder分析软件和Delta Ct法对该基因的稳定性进行评价，表明该基因适用于丝瓜盐胁迫下基因表达研究，并用该基因为基础设计了实时荧光定量PCR引物，为后续丝瓜功能基因的精确定量及功能研究奠定基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种丝瓜内参基因UBQ的引物及应用，具体提供适用于丝瓜盐胁迫下基因表达研究的内参基因，并揭露了利用该丝瓜内参基因为基础设计的实时荧光定量PCR引物。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：

以内参基因UBQ的核苷酸序列（如SEQ ID NO.1所示）为基础，利用Primer Premier 5.0软件、并遵循实时荧光定量PCR引物设计的原则设计出一对荧光定量特异引物，该对荧光定量特异引物即为所述实时荧光定量PCR引物；

且该实时荧光定量PCR引物为：

正向引物5'-TGCTTCGTCTCAGGGGTGG-3'，

反向引物5'-GTCCTGAATTTTAGCTTTCACATTAT-3'。

进一步地，利用所述实时荧光定量PCR引物，采用BestKeeper，GeNorm，NormFinder和RefFinder分析软件和Delta Ct法对UBQ基因的稳定性进行评价，表明UBQ基因在盐胁迫条件下最稳定。