[发明专利]成纤维细胞的原代培养方法在审
申请号: | 202010645278.X | 申请日: | 2020-07-06 |
公开(公告)号: | CN111748519A | 公开(公告)日: | 2020-10-09 |
发明(设计)人: | 邹畅;张荟蓉;张金玲;钱纯亘;赵盼;陈娟;梁真 | 申请(专利权)人: | 深圳市人民医院 |
主分类号: | C12N5/077 | 分类号: | C12N5/077 |
代理公司: | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人: | 徐乐 |
地址: | 518000 广东省*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 纤维 细胞 培养 方法 | ||
1.一种成纤维细胞的原代培养方法,其特征在于,组织标本经消化酶M消化处理,再在预处理过的培养器皿中培养,得到成纤维细胞;
所述消化酶M包括Enzyme H、Enzyme R和Enzyme A;
所述预处理包括:采用FBS对培养器皿进行处理;
所述培养包括:培养基的用量为覆盖培养器皿底部。
2.根据权利要求1所述的原代培养方法,其特征在于,组织标本包括宫颈癌组织或宫颈癌旁组织。
3.根据权利要求1所述的原代培养方法,其特征在于,组织标本经含0.9-1.1%双抗的PBS清洗,再剪碎后进行消化处理。
4.根据权利要求1所述的原代培养方法,其特征在于,所述消化酶M为美天妮试剂盒tumor dissociation kit human中的混合酶。
5.根据权利要求1所述的原代培养方法,其特征在于,消化处理的条件为36-38℃消化0.5-1h。
6.根据权利要求1所述的原代培养方法,其特征在于,利用含有8-12%FBS的DMEM完全培养基终止消化。
7.根据权利要求1所述的原代培养方法,其特征在于,采用FBS对培养器皿进行处理的条件包括36-38℃培养5-10min。
8.根据权利要求1所述的原代培养方法,其特征在于,培养器皿中培养采用的培养基为DMEM完全培养基。
9.根据权利要求1所述的原代培养方法,其特征在于,培养器皿中培养的条件包括36-38℃,4-6%CO2培养2-5天。
10.根据权利要求1-9任一项所述的原代培养方法,其特征在于,成纤维细胞包括肿瘤相关成纤维细胞或正常成纤维细胞。
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