[发明专利]一种灵敏度高、检测范围广的荧光免疫层析试纸

说明书

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种灵敏度高、检测范围广的荧光免疫层析试纸。荧光免疫层析试纸主要包括样品垫、结合垫1、结合垫2、检测线1、检测线2、质控线、硝酸纤维膜；通过使用两对标志物的不同反应性的抗体对，利用铕时间分辨荧光微球、量子点微球（em：615nm）分别作为检测标记物。利用不同标记物特性，以及不同抗体对组合的反应性，提高了不同浓度抗原的检测能力。低浓度灵敏度极大提升，高浓度检测范围极大拓展。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种灵敏度高、检测范围广的荧光免疫层析试纸。

背景技术

检测的灵敏度及检测范围受抗体对组合的反应性、标记物的种类等因素的影响。反应性好的抗体往往灵敏度高，但对于高浓度的样本往往由于胡克效应的存在检测性能不佳；反应性慢的抗体对于低浓度样本的检测性能不佳，但对于高浓度样本检测性能良好；对于荧光标记物的选择，标记物的荧光效率越高，检测的灵敏度越高。

针对于荧光标记物，荧光微球由于将多个荧光分子集成到一个微球中，大大提高了荧光效率，对于高灵敏度的检测具有不可比拟的优势，但是标记物体积的增大会提早胡可效应的节点，从而导致不能准确测定高浓度样本，缩短方法的检测范围。

小体积的荧光分子或微球，相对于荧光微球，荧光效率较低，对于低浓度标志物的检测不具备优势，但是能够延后免疫反应胡克效应的节点，对于测定高浓度标志物优势明显。

发明内容

针对现阶段荧光免疫层析试纸存在的问题，本发明通过使用两对标志物的不同反应性的抗体对，利用铕时间分辨荧光微球、量子点微球（em：615nm）分别作为检测标记物。综合各种材料的检测性能，提供了一种灵敏度高、检测范围广的荧光免疫层析试纸。

一种灵敏度高、检测范围广的荧光免疫层析试纸，包括样品垫、结合垫1、结合垫2、检测线1、检测线2、质控线、硝酸纤维膜；

所述的结合垫1包被抗体1修饰的铕时间分辨荧光微球；所述的结合垫2包被抗体2修饰的量子点微球；所述的检测线1包被捕获抗体1，与结合垫1配合；所述的检测线2包被捕获抗体2，与结合垫2配合；所述的抗体1、抗体2组合之间无交叉反应出现。

所述的样品垫在前，后面依次为：结合垫1、结合垫2、检测线1、检测线2、质控线。

上述荧光免疫层析试纸，还包括底板及吸水纸。

上述荧光免疫层析试纸中，所述的样品垫搭接于结合垫1一端上表面，结合垫1搭接于结合垫2一端上表面，结合垫2搭接于硝酸纤维素膜的一端上表面，吸水纸搭接于硝酸纤维素膜的另一端上表面，结合垫2端部与吸水纸端部之间外露的硝酸纤维素膜上，包被有与底板端面平行的检测线1、检测线2和质控线。

所述的样品垫为玻璃纤维、聚酯纤维、滤血膜等材料；结合垫1、2为玻璃纤维、聚酯纤维等材料。

上述荧光免疫层析试纸在检测降钙素原PCT上的应用。

铕时间分辨荧光微球、量子点微球（em：615nm）都具有激发光谱宽的特点，作为标记物时可以使用同样的检测条件进行荧光定量检测。利用两种标记物制作的荧光免疫层析试纸的检测线信号可以用同一荧光读数仪一次测定。

本发明利用铕时间分辨荧光微球（200nm、500nm等）、量子点微球（Ex：615，10nm）分别作为检测标记物。通过设置两个检测线，同时保证检测的范围及灵敏度。提供了一种可提高灵敏度、拓宽定量检测范围的荧光免疫层析试纸条制备方法。

附图说明

图1为本发明的荧光免疫层析试纸的结构示意图；

图2为实施例1不同降钙素原PCT浓度的荧光强度分析图；

图3为实施例2白介素6 IL-6浓度的荧光强度分析图；