[发明专利]一种筛选真阳性不出菇的食用菌变异菌株的方法

说明书

本发明公开了一种筛选真阳性不出菇的食用菌变异菌株的方法，其包括以下步骤：将待筛选的变异菌株进行光照培养一段时间；将光照培养后的菌丝进行糖原染色，初筛出菌丝生长速度快的且菌丝糖原染色呈阳性的菌落；将初筛得到的菌落进行出菇实验，出菇实验中的培养基含有GSK‑3激活剂，考察超过2倍出菇周期后不出菇的即为真阳性不出菇的变异菌株。本发明提供的一种高效筛选真阳性不出菇的食用菌变异菌株的方法，其解决现有技术中不出菇菌株生长早期缺乏明显筛选标志、工作量大、假阳性高的问题，该方法具有准确度高、快速高效、操作简便的特点。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种筛选真阳性不出菇的食用菌变异菌株的方法。

背景技术

食用菌菌株的选育备受重视，但多集中在子实体高产菌株的选育研究。食用菌菌丝具有多种应用，例如作为原料生产食药用的菌丝粉、多糖提取物，在新材料领域用于生产菌丝隔热板、菌丝缓冲板、菌丝可自我修复建材。但是菌丝在生长过程中如遇到温度、光照和营养物质的改变，会由营养生长路径转变为生殖性生长路径，进而发育出子实体、菌核、粉孢子等结构组织。生长路径的转变不但影响发酵转化率，使发酵中菌菇多糖等有效成分的比例无法预测，还会影响菌丝材料的结构稳定性。所以需要高效的方法选育出只长菌丝而不长子实体的菌株，以提高大规模工业生产的效率和稳定性。

现有常规的食用菌菌株选育方法有自然选育和人工选育，人工选育又包括基因工程育种、杂交育种、诱变育种、原生质体融合育种等。筛选育种所得到的变异菌株的常规鉴定方法，包括形态学鉴定、生化标记和分子生物学鉴定，但是常规鉴定方法不仅工作量大，而且筛选周期长、筛选出的菌株不稳定。特别是在筛选不出菇且菌丝生长快的菌株时，变异菌株中理想菌株的比例较低，而且还存在大量的假阳性不出菇菌株，当外界环境稍有变化，这些菌株又会复生出子实体，导致大规模工业培养上的损失。

再者，目前尚未见到有关针对不出菇食用菌的菌株筛选方法的任何报道。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种筛选真阳性不出菇的食用菌变异菌株的方法，其解决现有技术中不出菇菌株生长早期缺乏明显筛选标志、工作量大、假阳性高的问题，该方法具有准确度高、快速高效、操作简便的特点。

本发明的上述目的是通过以下技术方案予以实现的。

一种筛选真阳性不出菇的食用菌变异菌株的方法，其包括以下步骤：将待筛选的变异菌株进行光照培养一段时间；将光照培养后的菌落进行糖原染色，初筛出菌丝生长速度快的且菌丝糖原染色呈阳性的菌落；将初筛得到的菌落进行出菇实验，出菇实验中的培养基含有GSK-3激活剂，考察超过2倍出菇周期后不出菇的即为真阳性不出菇的变异菌株。

进一步地，所述初筛出菌丝生长速度快的且菌丝糖原染色呈阳性的菌落中，菌丝生长速度快的菌落可以理解为：以菌落为筛选条件，则是指直径为1～20mm的菌落，更优选地5～15mm的菌落；或，以菌丝为筛选条件，则是指快速生长期的菌丝生长速度为4mm/day以上的菌落；或，是指同一批菌落中直径较大的菌落或菌丝生长速度较快的菌落，具体是指按菌落直径由大到小排序后或菌丝生长速度由快到慢排序后居前的1～1000个菌落，优选地，10～1000个菌落，更优选地，10～100个菌落，但并不局限于此。菌丝糖原染色呈阳性的菌落可以理解为呈现红色的菌落，优选地，红色的菌落如其菌丝呈现红色、红褐色、红棕色、棕红色等等，更优选地，如其菌丝呈现粉红色除外的红色，可以理解的是，当菌丝呈现粉红色，则该菌落不进入下一步骤。

作为本发明提供的所述的筛选真阳性不出菇的食用菌变异菌株的方法的一种改进，所述光照培养是指恒温恒湿下，给予每天不低于12h的光照，当最大菌落直径5mm以上或者最快菌丝快速生长期的生长速度4mm/day以上后即可进行糖原染色。