[发明专利]一种抑制香果树愈伤组织褐化的方法

说明书

本发明涉及一种抑制香果树愈伤组织褐化的方法，该方法包括以下步骤：(1)外植体的消毒：以香果树叶柄作为外植体，进行消毒，得到消毒后的外植体；(2)愈伤组织诱导：将消毒后的外植体在无菌条件下，接种在愈伤组织诱导培养基上，培养后，外植体上形成愈伤组织；(3)防褐化继代培养：将愈伤组织转入继代培养基，进行继代培养，达到抑制香果树愈伤组织褐化的效果。与现有技术相比，本发明以香果树的叶柄为外植体，采用特有的愈伤组织诱导培养基进行愈伤组织诱导，利用抑制褐化继代培养基进行继代培养，使愈伤组织褐化率降低至3.3％。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及抑制香果树愈伤组织褐化的方法。

背景技术

香果树系茜草科香果树属的高大落叶乔木，起源于距今约1亿年的中生代白垩纪，是第四纪冰川孑遗植物，中国特有单种属稀有树种，在茜草科植物系统发育、形态演化及中国植物地理区系研究以及观赏、药用、材用等方面都极具价值。

在自然状态下，香果树有典型的间歇性结实特性，2-4年开花结果一次；种子有休眠特性，种子细小、生活力低下、寿命仅有1年，自然萌发率极低，种群呈衰退趋势，濒临灭绝，已被列为国家二级保护植物。利用植物组织培养的方法开展野生香果树种苗繁育技术的研究，对于克服香果树种子繁殖中存在的困难，挽救珍稀濒危野生香果树种质资源，实现香果树种质资源的可持续利用具有重要意义。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种抑制香果树愈伤组织褐化的方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种抑制香果树愈伤组织褐化的方法，该方法包括以下步骤：

(1)外植体的消毒：以香果树叶柄作为外植体，进行消毒，得到消毒后的外植体；

(2)愈伤组织诱导：将消毒后的外植体在无菌条件下，接种在愈伤组织诱导培养基上，培养后，外植体上形成愈伤组织；

(3)防褐化继代培养：将愈伤组织转入继代培养基，进行继代培养，达到抑制香果树愈伤组织褐化的效果。

进一步地，所述的消毒，具体方法为：依次用酒精、次氯酸钠消毒，然后用无菌水洗净。

进一步地，所述的愈伤组织诱导培养基的组成为：按每升计算，由495mg K₂SO₄、185mg MgSO₄·7H₂O、85mg KH₂PO₄、200mg NH₄NO₃、11.25mg MnSO₄·4H₂O、4.3mg ZnSO₄·7H₂O、3.1mg H₃BO₃、0.125mg CuSO₄·5H₂O、0.125mg Na₂MoO₄·2H₂O、278mg Ca(NO₃)₂·4H₂O、13.9mg FeSO₄·7H₂O、18.65mg Na₂-EDTA、50mg肌醇、1mg甘氨酸、0.5mg维生素B₁、0.25mg维生素B₅、0.25mg维生素B₆、2mg 6-BA、0.5mg 2,4-D、20g蔗糖、6g琼脂和余量的水组成。

进一步地，步骤(2)中所述的培养的温度为25±2℃，时间为20天；步骤(3)中所述的继代培养的温度为25±2℃，时间为20天。