[发明专利]一种小羔羊类表皮生长因子活性肽的提取方法

说明书

本发明涉及一种小羔羊类表皮生长因子活性肽的提取方法，包括如下步骤：将小羔羊下颚下腺进行高速均质，加入缓冲溶液，提取，离心，收集上清液；将上清液在加入硫酸铵饱和，收集沉淀，透析除盐，浓缩，冻干。本发明的类表皮生长因子活性肽PI值为4.5，溶于酸性溶液中，通过阳离子交换树脂把类表皮生长因子活性肽吸附到阳离子交换树脂中，再用缓冲溶液将类表皮生长因子活性肽洗脱下来，把含有类表皮生长因子活性肽洗脱液再用阴离子交换树脂把类表皮生长因子活性肽吸附出来，用酸性溶液洗脱出来，达到纯化的目的，采用本发明的方法提取的类表皮生长因子活性肽收率高，活性强，纯度高，成本低，损耗小，可以大规模生产。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种小羔羊类表皮生长因子活性肽的提取方法。

背景技术

表皮生长因子(EGF)是一类重要的生长因子，是类EGF大家族的一个成员，它是由50-60个氨基酸分子组成的肽链，链中含有6个半胱氨酸分子，半胱氨酸分子间形成稳定的双硫键。使整条肽链成为三个环联部分的活性物质。它是一种广泛存在于人或其它动物体内的小分子多肽，极微量即能强烈刺激细胞生长、抑制衰老基因的出现，延缓表皮细胞衰老，通过与其受体相结合发挥作用。表皮生长因子通过与细胞表面的受体表皮生长因子受体(EGFR)结合而起作用。与表皮生长因子受体的高亲和力结合，激发受体内在的酪氨酸激酶的活性，从而启动了信号传导级联而导致多种生物化学变化，细胞内钙水平上升，增加糖酵解与蛋白质合成，增加某些基因(包括表皮生长因子受体)的表达，最终导致DNA合成和细胞增殖。

1960年,Cohen用羧甲基纤维素从小鼠颌下腺分离纯化神经生长因子(NGF)时,发现另一类促进新生小鼠出牙和睁眼的“Tooth-Factor”,后改名为Epidermal GrowthFactor(EGF)。随后,在人尿、大白鼠、猪等中均发现了各种各样的表皮生长因子hEGF、mEGF和g-PEGF。1979年,Carpenter G等报道了hEGF的氨基酸残基组成。同年,Gregory从人尿中发现了能抑制胃酸分泌的胃抑素(Urogastrone),其实与hEGF为同一物质。1986年,Cohen由于在hEGF的杰出贡献而荣获诺贝尔医学与生理学奖。由于小鼠额下腺资源少，提取率低，小羔羊资源广，我国西北地区出名的手抓羊肉，就是羔羊肉。所以小羔羊下额下腺资源丰富，而且从小羔羊下腺提取纯化的类表皮生长因子多肽具有同等活性。

鉴于以上原因，特提出本发明。

发明内容

为了解决现有技术存在的以上问题，本发明提供了小羔羊类表皮生长因子活性肽的提取方法，本发明的提取方法提取的类表皮生长因子活性肽收率高，活性强，纯度高，降低成本，减少损耗，可以大规模生产。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种小羔羊类表皮生长因子活性肽的提取方法，包括如下步骤：

(1)将小羔羊下颚下腺在速度为12500-13500rpm下进行均质25-35min，加入缓冲溶液，提取3-5h，离心，收集上清液；

(2)将上清液在加入硫酸铵饱和，温度为1-5℃下过夜放置，收集沉淀，透析除盐，浓缩，冻干，得到所述的小羔羊类表皮生长因子活性肽。

进一步的，步骤(1)中高速均质的温度为4-6℃，优选的，温度为5℃。

进一步的，步骤(1)中所述的缓冲溶液为NH4AC-HAc，所述的缓冲溶液的pH值为3，浓度为0.04-0.06mol/L。

进一步的，小羔羊下颚下腺与缓冲溶液的质量比为1:8-12，优选的，质量比为1:10。

进一步的，步骤(2)中透析除盐，透析液用乙酸钠-乙酸调节pH至3，采用阳离子交换树脂进行吸附，收集阳离子交换树脂，洗脱，收集洗脱液，洗脱液采用阴离子交换树脂吸附，收集阴离子交换树脂，洗脱，收集洗脱液，离心，收集上清液，纳滤除盐。