[发明专利]一种犬细小病毒VP2蛋白重组抗原、其编码基因及其表达和应用

说明书

本发明涉及基因工程领域，尤其涉及一种犬细小病毒VP2蛋白重组抗原、其编码基因及其表达和应用，包括一种犬细小VP2蛋白重组抗原基因、由该基因编码的一种犬细小VP2蛋白重组抗原、一种表达犬细小VP2蛋白重组抗原的方法及其在制备胶体金中应用。本发明在大肠杆菌表达系统中重组表达了VP2蛋白，具有生产周期短，产量高，成本低，特异性好的优点；重组蛋白上的His标签有利于一步纯化达到较高的纯度，并且不需酶切即可表现较好地活性；以重组抗原可作为犬细小病毒胶体金检测试剂条的一部分，敏感性高，特异性好，稳定性好，操作简便，适合作为常规检测手段。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，尤其涉及一种犬细小病毒VP2蛋白重组抗原、其编码基因及其表达和应用。

背景技术

犬细小病毒病是一种由犬细小病毒感染幼犬引起的急性传染病。临床上有两种表现型, 出血性肠炎型以剧烈的呕吐、出血性肠炎和白细胞显著减少为主要特征;心肌炎型则以突然死亡为特征。无论那种类型的临床表现，均以发病率高、死亡率高和传染性强为特点，是危害养犬业最为严重的传染病之一，可造成严重的经济，因此犬细小病毒病的及时检测诊断显得尤为重要。

由于犬细小病毒病存在与其他犬类疾病相似的临床症状，所以很难通过医学临床观察确诊CPV感染，需要通过分子层面的技术手段来确然病毒感染。目前已经建立的检测方法有ELISA、PCR、HA、HI等，ELISA不能分辨野菌感染和疫苗免疫效果，PCR敏感性高，但对设备要求高，HA和HI需要搭配使用且不方便，例如公开号为CN105803112A的“用于检测犬细小病毒的引物、探针和试剂盒及检测方法”，包括：上游检测引物CPV-F包括一种核苷酸序列；下游检测引物CPV-R包括另一种核苷酸序列。探针包括第三种核苷酸序列。试剂盒包括上述的引物和探针。该发明虽然灵敏度高，但是其对于设备的要求高，并且检测时间长，需要数小时才能检测出结果，并且标记稳定性较差，不适合用于常规检测手段。

发明内容

本发明是为了克服现有检测方法对设备要求高、检测时间长、不适合用于常规检测的缺点，提供一种犬细小病毒VP2蛋白重组抗原、其编码基因及其表达和应用，能够以该抗原为标记抗原用于胶体金检测试剂条的制备，标记技术敏感性高，特异性好，稳定性好，操作简便，适合作为犬细小病毒的常规检测手段。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种犬细小病毒VP2蛋白重组抗原基因，其序列如SEQ ID NO.2 所示。

由上述基因编码的一种犬细小病毒VP2蛋白重组抗原，其特征是，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明选用VP2蛋白作为犬细小病毒的VP2蛋白作为胶体金技术中的标记抗原，其CPV的中和抗原位点位于VP2上，VP2是CPV的免疫原性蛋白，编码CPV的主要抗原决定簇，可诱导机体产生中和抗体。

包含上述重组抗原基因的重组载体。

作为优选，所述载体为大肠杆菌BL21表达载体。本发明重组蛋白基因由人工合成，所用的载体为pET30a，为卡那抗性，融合表达组氨酸标签，蛋白定位于细胞周质。

包含上述抗原基因的重组菌株。

一种表达犬细小VP2蛋白重组抗原的方法，包括以下步骤：

（1）将上述的重组载体转化大肠杆菌BL21细胞，得重组菌株；

（2）重组菌株在35-37℃、LB培养基中摇瓶培养至OD=0.5-0.7，加入0.8-1.2mM IPTG，在35-37℃、200-250rpm下诱导表达3-5小时；

（3）诱导结束后离心回收、破菌取上清并纯化所表达的犬细小病毒VP2蛋白重组抗原。