[发明专利]一株吉富罗非鱼脑神经细胞系、转染方法、培养方法及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一株吉富罗非鱼脑神经细胞系、转染方法、培养方法及其应用。本申请从吉富罗非鱼脑组织中分离培养了一株永生细胞系，命名为TBN。该细胞系具有类似神经元的形态特征，表达一系列神经细胞的标记基因，是一株神经前体细胞系；其对低温敏感，不能在16℃及以下的低温条件下存活；而且容易转染，采用电穿孔方法转染效率高达52％。该细胞系可以作为研究罗非鱼抗寒相关基因功能的良好模型，填补相关领域空白。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一株吉富罗非鱼脑神经细胞系、转染方法、培养方法及其应用。

背景技术

罗非鱼(Oreochromis sp.)具有生长快、抗病力强、营养丰富等优良性状，是重要的水产养殖品种之一。但是其不耐低温的特性导致养殖地域严重受到限制、养殖成本增加以及养殖效益降低。由于罗非鱼个体大，具有筑巢和将受精卵含在口中孵化等习性，因此不易进行显微注射等操作，难以像斑马鱼(Danio rerio)等研究模型一样高效地开展靶向基因功能研究，因此目前对罗非鱼耐寒性状遗传决定基础的认识还很不足。

鱼类的不同组织中以脑神经系统对低温损伤最敏感。在致死低温暴露过程中，平衡能力的丧失是鱼体产生低温损伤的最早表现，而且即使将受损的鱼放回正常温度也难以恢复。因此，建立既具有低温敏感特征、又能被高效转染的罗非鱼脑神经细胞系，突破应用活体罗非鱼进行基因功能研究的局限，对于解析抗寒相关基因的功能和作用机制具有重要的意义。

吉富罗非鱼是通过对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)进行系统的遗传选育而获得的新品系，其生长速度明显提高，但是耐寒能力却显著低于尼罗罗非鱼基础群体。虽然目前已经从尼罗罗非鱼和莫桑比克罗非鱼(Oreochromis mossambicus)的脑、心脏、卵巢、肾脏、肝脏和唇上皮等组织中分离和建立了细胞系，如脑组织来源的TB2、TiB、OnlB和OmB等细胞系，但还没有吉富罗非鱼的脑神经细胞系。研究者们建立这些罗非鱼细胞系的主要目的是用于分离和培养病毒，而且这些细胞系都无法商业获取，有的细胞系报道的时间已经非常久远。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一株吉富罗非鱼脑神经细胞系、转染方法、培养方法及其应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。

本发明是这样实现的，一株吉富罗非鱼脑神经细胞系，保藏编号为CCTCC NO:C2020106，已于2020年6月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，名称为吉富罗非鱼脑神经细胞。该细胞既具有低温敏感特征、又能被高效转染。

如上述的吉富罗非鱼脑神经细胞系的转染方法，包括电穿孔转染和转染试剂转染，优选为电穿孔转染。

如上述的吉富罗非鱼脑神经细胞系的培养方法，培养基为Leibovitz’s L-15，培养基中FBS的质量百分比大于2.5％，小于20％，培养温度为26-32℃。

进一步地，培养温度优选为32℃。

如上述的吉富罗非鱼脑神经细胞系、或转染方法、或培养方法在吉富罗非鱼靶向基因功能研究中的应用。

进一步地，所述应用的方法中，吉富罗非鱼脑神经细胞系的识别特征分子包括timp2b，tagln，s100a10a，prdx1，rps12，apoeb，rps25，s100a10b，clu和tspan中的至少一种。

综上所述，本发明的优点及积极效果为：