[发明专利]一种OTA适配体及其互补序列及OTA荧光检测方法

说明书

本发明涉及分析化学和食品安全技术领域，尤其涉及了一种OTA适配体及其互补序列及OTA荧光检测方法。其中，一种基于适配体的OTA荧光检测方法，包括：利用被其互补核苷酸序列结合的适配体与OTA特异性结合；通过染料对所述适配体与OTA的结合物进行荧光标记；通过光谱荧光强度检测及浓度测定，检测所述结合物的浓度以检测OTA的含量；其中，所述适配体如SEQ ID NO:1所示，所述互补核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明提出的OTA适配体，具有与OTA结合特异性好、结构稳定的特点；其中，互补的核苷酸序列用于提高对OTA的检测精度。基于本发明的OTA适配体及其互补序列的OTA荧光检测方法不但检测准确度较高，且操作过程简单，对操作人员的要求较低，更加利于实际应用。

技术领域

本发明涉及分析化学和食品安全技术领域，尤其涉及了一种OTA适配体及其互补序列及OTA荧光检测方法，用于检测物质中OTA的含量。

背景技术

赭曲霉素A(OTA)是一种由曲霉属和青霉属等不同真菌种类产生的毒素，有研究表明，其具有肾毒性，对人类具有强烈的致畸、神经毒性、免疫毒性和致癌作用。赭曲霉素A会对谷物、小麦、玉米、豆类和葡萄酒等多种农产品造成污染。赭曲霉素A在世界范围内都有检测到，鉴于食品供应的全球化以及赭曲霉素A对人类健康的潜在威胁，开发一种针对赭曲霉素A的检测技术具有积极且重要的意义。

现有技术中也有利用适配体对OTA进行检测的，然而其需要对适配体事先进行标记(在适配体的核苷酸上标记信号分子或纳米材料)，而后再用于与OTA的靶向结合，这就造成了其样品处理过程复杂，且对操作人员的要求较高，从而限制了其OTA检测方法的应用。

发明内容

为解决背景技术中提出的问题，本发明提出了基于一种OTA适配体及其互补核苷酸序列及OTA荧光检测方法。其中，本发明的OTA荧光检测的方法不但检测准确度较高，且操作简单，更加利于实际应用。

首先，本发明提出了一种OTA适配体，适配体的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示。

其次，本发明还提出了一种OTA适配体的互补核苷酸序列，互补核苷酸序列如SEQID NO:2所示。

此外，本发明还提出了一种基于适配体的OTA荧光检测方法，包括：利用被其互补核苷酸序列结合的适配体与OTA特异性结合；通过染料对适配体与OTA的结合物进行荧光标记；通过光谱荧光强度检测及浓度测定，检测结合物的浓度以检测OTA的含量；其中，适配体如SEQ ID NO:1所示，互补核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

在一个或多个实施例中，OTA荧光检测方法还包括：配置TE缓冲液，用于溶解适配体及其互补核苷酸序列；其中，TE缓冲液的成分包括：10mM/LKCl、10mM/L Tris-HCl缓冲溶液、1mM/L乙二胺四乙酸钠，且TE缓冲液的PH为7.4。

在一个或多个实施例中，OTA荧光检测方法还包括：利用TE缓冲液分别溶解适配体及其互补核苷酸序列，获得适配体溶液以及互补核苷酸序列溶液，4℃保存。

在一个或多个实施例中，利用被其互补核苷酸序列结合的适配体与OTA特异性结合，包括：将适配体溶液与互补序列核苷酸溶液按1:2的体积混合，82℃下孵育10分钟，自然冷却至室温，4℃保存，作为存储液；将10μL存储液与10μL与含有OTA的样本溶液均匀混合，孵育10分钟后，形成第一混合物。

在一个或多个实施例中，通过染料对适配体与OTA的结合物进行荧光标记，包括：将第一混合物依次加入170μL 50mM/L的HEPES缓冲溶液以及10μL 2μM/L的硫黄素T溶液，95℃下加热5分钟后在冰水中冷却10分钟退火，形成第二混合物。