[发明专利]农药醚菊酯荧光定量免疫层析检测试纸及其应用

权利要求书

1.苯乙酸-醚菊酯偶氮化物，按照包括如下方法的步骤制备得到：首先将16mg对-氨基苯乙酸溶于预冷的2N盐酸，冰水浴条件下，边搅拌边加入0.5M NaNO₂，以碘化钾淀粉试纸监测，试纸变蓝即停；再取25mg醚菊酯标准品置于pH9.0的硼酸盐缓冲液中；冰水浴，边搅拌边将制备好的对氨基苯乙酸重氮盐加入醚菊酯悬液，加完继续搅拌30min；所得红色液体加入少量HCl，有红色沉淀产生，离心，弃上清；沉淀即为苯乙酸-醚菊酯偶氮化物，具体合成路线如下：

2.一种偶联物，为权利要求1所述的苯乙酸-醚菊酯偶氮化物与载体蛋白1的偶联物。

3.根据权利要求2所述的偶联物，其特征在于：所述载体蛋白1为鸡卵清蛋白。

4.根据权利要求3所述的偶联物，其特征在于：所述苯乙酸-醚菊酯偶氮化物与鸡卵清蛋白的偶联比为8:1。

5.农药醚菊酯荧光定量免疫层析检测试纸条，由依次连接并固定于底板上的样品垫、标记物结合垫、设有检测线和质控线的层析膜，以及吸水垫组成；

所述标记物结合垫上有经荧光微球标记的抗醚菊酯抗体；

所述检测线和所述质控线相互分离；

所述检测线处包被有权利要求4所述的偶联物；

所述质控线处包被有二抗，所述二抗为抗所述经荧光微球标记的抗醚菊酯抗体的抗体；

所述检测线位于所述层析膜靠近所述样品垫的一端；

所述质控线位于所述层析膜靠近所述吸水垫的一端；

所述抗醚菊酯抗体为以4-氧代-4-(3-苯氧基苄氧基)丁酸与载体蛋白2的偶联物作为免疫原免疫兔子以后得到的多克隆抗体；所述载体蛋白2为牛血清白蛋白；

所述4-氧代-4-(3-苯氧基苄氧基)丁酸与牛血清白蛋白的偶联比为15:1。

6.根据权利要求5所述的试纸条，其特征在于：在所述抗醚菊酯抗体的制备过程中，以所述4-氧代-4-(3-苯氧基苄氧基)丁酸与载体蛋白2的偶联物作为免疫原免疫兔子的免疫程序如下：

首次免疫：将所述4-氧代-4-(3-苯氧基苄氧基)丁酸与载体蛋白2的偶联物和弗氏完全佐剂混合后，多点皮内注射免疫兔子，所述4-氧代-4-(3-苯氧基苄氧基)丁酸与载体蛋白2的偶联物的用量为200-1000μg/只兔子；

加强免疫：首次免疫两周后进行第一次加强免疫，将所述4-氧代-4-(3-苯氧基苄氧基)丁酸与载体蛋白2的偶联物和弗氏不完全佐剂混合后，多点皮内注射免疫兔子，所述4-氧代-4-(3-苯氧基苄氧基)丁酸与载体蛋白2的偶联物的用量为50-400μg/只兔子；第一次加强免疫两周后进行第二次加强免疫，免疫方式、剂量同第一次加强免疫。

7.根据权利要求6所述的试纸条，其特征在于：在所述抗醚菊酯抗体的制备过程中，于第二次加强免疫后第10天采血，制备血清即为多抗血清；然后将所述多抗血清进行ProteinG柱纯化，透析和PEG浓缩后得到所述抗醚菊酯抗体。

8.农药醚菊酯荧光定量免疫层析检测试纸卡，由权利要求5-7任一中所述的试纸条和与所述试纸条扣合且符合如下条件的盖板组成：所述盖板上具有与所述样品垫对应的加样窗口，以及与所述检测线和所述质控线对应的显示窗口。

9.权利要求1所述的苯乙酸-醚菊酯偶氮化物或权利要求2-4中任一所述的偶联物或权利要求5-7中任一所述的试纸条或权利要求8所述的试纸卡在检测醚菊酯中的应用。

10.权利要求1所述的苯乙酸-醚菊酯偶氮化物或权利要求2-4中任一所述的偶联物在制备权利要求5-7中任一所述的试纸条或权利要求8所述的试纸卡中的应用。

11.一种检测待测样品中醚菊酯含量的方法，包括：

(C1)绘制标准曲线：配制系列浓度的醚菊酯的标准品溶液，分别用权利要求5-7中任一所述的试纸条或者权利要求8所述的试纸卡进行检测，将所述标准品溶液加入到所述试纸条的所述样品垫或者所述试纸卡的加样窗口，反应10min；用荧光读数仪读取所述质控线和所述检测线的荧光强度；以所述醚菊酯的标准品的浓度为横坐标，以所述检测线和所述质控线的荧光强度比值为纵坐标，绘制标准曲线图，得到标准曲线方程；

(C2)待测样品检测：将所述待测样品加入到所述试纸条的所述样品垫或者所述试纸卡的加样窗口，反应10min；用荧光读数仪读取所述试纸条的所述质控线和所述检测线的荧光强度，将所述检测线和所述质控线的荧光强度比值代入步骤(C1)所得标准曲线方程，计算得到所述待测样品中的醚菊酯的浓度值。