[发明专利]核固红染色在抗双链DNA检测方法中新用途

说明书

本发明公开了一种核固红染色在抗双链DNA检测方法中新用途，属于免疫分析技术领域，本发明的技术方案是以绿蝇短膜虫为抗原基质，应用甘油核固红染色液进行封片染色，间接免疫荧光检测抗dsDNA抗体，绿蝇短膜虫体内的细胞核细胞核呈现橘红色或者黄色；与鞭毛相连接的部位即为鞭毛基体，被染成浅橘红色或者浅黄色；体积略小于细胞核大于鞭毛基体，位置介于两种细胞器中间的即为动基体，动基体出现绿色荧光即为抗dsDNA抗体阳性，本发明的技术特点是能够在荧光显微镜下清晰辨别细胞核，动基体，鞭毛基体三种细胞器。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域；或是利用可见光，通过测试反应的结果产生颜色变化来测试材料的方法，特别是应用核固红染色和免疫荧光检测抗双链DNA测定方法。

背景技术

实验室检测抗双链DNA(dsDNA)抗体的常规方法有ELISA、绿蝇短膜虫间接免疫荧光检测(CLIFF)和免疫印迹法(IBT)，但美国风湿病学会(ACR)1997年修定的SLE分类诊断标准中并未对抗dsDNA抗体的检测方法进行限定。临床实验室常采用间接免疫荧光检测dsDNA，本方法以绿蝇短膜虫为抗原基质，检测血清中抗双链DNA抗体，绿蝇短膜虫(crithidia luciliae)属原生动物门动鞭毛虫纲动质目短膜虫属，主要寄生在节肢动物体内，对人畜无害，它的身体大多呈椭圆形，中间有一个大的核，尾部有一根长长的鞭毛帮助身体运动，在鞭毛基部和核之间有一个略小于核的线粒体(也称动基体)，该动基体内含有大量的纯的dsDNA，通常不含有其它抗原，抗dsDNA抗体阳性表现为动基体均质的或边缘亮度增强的荧光，仅细胞核或鞭毛基体出现的荧光判断为抗dsDNA抗体阴性。

核固红，又称钙红，细胞核坚牢红，核快红，分子式：C₁₄H₈NNaO₇S，分子量：357.28，性状：遇氢氧化钠成浅紫色，在硫酸中为棕色溶液，溶于乙醇和水，最大吸收波长518nm，有刺激性，文献上也有指本品为中性红(Neutral red)的，颜色指数(Colour Index Number)60760，水中溶解度:1g/L(25℃)，密封阴凉干燥避光保存，临床上主要用于病理学染色，在本发明用于区分绿蝇短膜虫体内的细胞核，动基体，鞭毛基体，而不干扰荧光测定。

目前检测方法中存在的问题是：荧光显微镜下绿蝇短膜虫体内的细胞核，动基体，鞭毛基体很难分辨，结构模糊，荧光特征可以出现三种细胞器可以同时阴性，同时阳性，或者其中的一个或两个阳性等情况，细胞核和动基体大小基本相似，很难分辨动基体的荧光模型。

发明内容

本发明目的是提供一种准确区分细胞核，动基体，鞭毛基体三种细胞器的核固红染色抗dsDNA抗体荧光测定方法，该方法使绿蝇短膜虫体内的细胞核呈现橘红色或者黄色；与鞭毛相连接的部位即为鞭毛基体，染色为浅橘红色或者浅黄色；体积略小于细胞核大于鞭毛基体，介于两种细胞器中间的即为动基体，动基体出现绿色荧光即为抗dsDNA抗体阳性。

采用的技术方案是：本方法以绿蝇短膜虫为抗原基质，检测血清中抗双链DNA抗体，应用甘油核固红染色液进行封片染色，间接免疫荧光检测抗dsDNA抗体，绿蝇短膜虫体内的细胞核细胞核呈现橘红色或者浅黄色；与鞭毛相连接的部位即为鞭毛基体，染色为浅橘红色或者浅黄色；体积略小于细胞核大于鞭毛基体，介于两种细胞器中间的即为动基体，动基体出现绿色荧光即为抗dsDNA抗体阳性。

附图说明

图1本发明绿蝇短膜虫体内细胞核、动基体、鞭毛基体结构示意图。

图中：1.虫体 2.细胞核

3.动基体 4.鞭毛基体

5.鞭毛

具体实施方式

实施例1