[发明专利]BP180 IgE抗体浓度检测试剂盒及其检测方法与应用

说明书

本发明提供了一种BP180 IgE抗体浓度检测试剂盒及其检测方法与应用，属于IgE检测方法技术领域。该试剂盒包括：微孔条带、标准血清一、标准血清二、酶标记抗体液、反应用缓冲液、清洗缓冲液、酶基质液、终止液以及封板和贴膜。本发明提供的BP180 IgE抗体浓度检测试剂盒及其检测方法与应用，极大地方便了NBP患者血清中BP180 IgE抗体的快速检测；同时能够快速地有效地检测出患者血清中BP180 IgE抗体的浓度，以使其作为NBP诊断的次要指标之一；进一步的通过BP180 IgE抗体浓度检测试剂盒检测患者血清中BP180 IgE抗体，还能够作为评估NBP病情严重程度的指标之一。

技术领域

本发明涉及IgE检测方法技术领域，具体而言，涉及一种BP180 IgE抗体浓度检测试剂盒及其检测方法与应用。

背景技术

大疱性类天疱疮(Bullous Pemphigoid，BP)是最为常见的自身抗体介导的自身免疫性大疱性皮肤病，通常好发于老年人，病程迁延，重症患者可累及周身大面积，死亡率30％-50％左右。BP典型的临床表现为正常皮肤或红斑基础上出现紧张性水疱或大疱，并伴有严重瘙痒。但近年来发现，超过20％的 BP患者不出现典型的大疱，而表现为瘙痒性非大疱皮损，如红斑、荨麻疹样斑块、丘疹、结节、表皮剥脱、湿疹及红皮病等。故目前这类以非大疱性皮损为主要临床表现的BP被称为非大疱性类天疱疮(Nonbullous Pemphigoid， NBP)。部分NBP患者在长期病程后可出现大疱表现，但大多数患者始终无大疱出现。由于其缺乏典型临床表现，诊断困难，尤其早期确诊率极低、误诊率极高，造成治疗原则偏差、患者迁延不愈，部分加重，甚至死亡。

目前已知BP患者血清中存在特异性自身抗体，以IgG抗体为主，也有IgE、 IgM及IgD抗体等。循环抗体针对的靶抗原为位于基底膜带中的BP抗原 (Bullous PemphigoidAntigen，BPAG)，包括分子量为230kDa的胞内蛋白 BPAG1，也称BP230；及分子量为180kDa的跨膜蛋白BPAG2，也称BP180。 BP180胞外区的羧基末端由15个胶原区和16个非胶原(Noncollagenous，NC) 区组成，其中第16段非胶原区NC16A段为抗体的主要结合位点。BP患者血清中BP180 IgG抗体阳性率明显较高，并与疾病的严重程度呈正相关。近年来有报道BP患者血清BP180 IgE抗体也较健康人群增高，但尚无报告其水平与BP或NBP病情严重程度的相关性。NBP与BP除临床表现不同外，其部分检测指标亦存在一定差异性。但截至目前，针对NBP的研究极少，尚无针对NBP 的特异性检测方法及病情严重程度评估的报告。

发明内容

鉴于此，本发明旨在提出了一种能够快速检测人体血清中BP180 IgE抗体浓度的检测试剂盒、检测方法以及该试剂盒在评估NBP患者疾病严重程度过程中的应用。

首先，本发明提出了一种BP180 IgE抗体浓度检测试剂盒，其包括：微孔条带、标准血清一、标准血清二、酶标记抗体液、反应用缓冲液、清洗缓冲液、酶基质液、终止液以及封板和贴膜；

其中，所述微孔条带上包被有BP180NC16A抗原蛋白，所述标准血清一为含0.09％叠氮钠的反应用缓冲液，所述标准血清二为BP180 IgE抗体呈阳性的人类血清，所述酶标记抗体液为标记辣根过氧化物的羊抗人IgE抗体，所述反应用缓冲液为含PBS、Tween20和0.09％叠氮钠的混合液，所述清洗缓冲液为含PBS和Tween20的浓缩液，所述酶基质液为3、3’、5、5’-四甲基联苯胺二氢氯化物/过氧化氢溶液，所述终止液为硫酸溶液。

进一步地，上述BP180 IgE抗体浓度检测试剂盒中，所述标准血清一、标准血清二、酶标记抗体液、反应用缓冲液、清洗缓冲液、酶基质液、终止液的体积分别为：1.5mL、1.5mL、8mL、50mL、100mL、20mL以及20mL。

进一步地，上述BP180 IgE抗体浓度检测试剂盒中，所述标准血清一的酶活力为0U/mL。