[发明专利]微小隐孢子虫病抗体检测试纸条及其应用

权利要求书

1.微小隐孢子虫抗体检测试纸条，包括样品吸收垫、胶体金垫、反应膜、吸水垫和背板，所述样品吸收垫上有加样孔；所述胶体金垫上包被有胶体金标记的蛋白A；所述反应膜上有检测区和质控区，其中检测区包被微小隐孢子虫CP23-GP15串联重组蛋白，所述微小隐孢子虫CP23-GP15串联重组蛋白是将扩增得到的CP23和GP15基因序列通过重叠延伸PCR技术进行连接串联，然后克隆到pET28a表达载体，构建重组表达质粒pET28a-CP23-GP15，经大肠杆菌表达系统表达纯化获得的；所述质控区包被鸡抗蛋白A；

所述微小隐孢子虫抗体检测试纸条，是由如下步骤制得而成：

1）微小隐孢子虫CP23-GP15串联重组蛋白的制备：以微小隐孢子虫DNA文库为模版，针对微小隐孢子虫CP23、GP15基因序列设计特异性引物，通过PCR扩增目的片段并克隆至表达载体pET28a，将成功构建的重组表达质粒pET28a-CP23-GP15转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，IPTG诱导表达，经亲和层析和分子筛层析高度纯化后得到CP23-GP15串联重组蛋白；

2）胶体金垫的制备：将胶体金标记的蛋白A喷涂在胶体金垫上，真空抽干后干燥保存备用；

3）检测区和质控区的制备：将步骤1）中获得的微小隐孢子虫CP23-GP15串联重组蛋白稀释为1.0mg/ml的CP23-GP15溶液与1.5mg/ml鸡抗蛋白A分别喷涂在反应膜上，形成检测线与质控线，37℃干燥16h，密封保存备用；

4）试纸条的组装：在背板上沿试纸条的轴向依次将样品吸收垫、胶体金垫、反应膜、吸水垫粘贴在背板上，制成试纸条；

所述微小隐孢子虫CP23基因序列扩增时所用的引物为序列表的序列1-2所示；

所述微小隐孢子虫CP23基因核酸序列为序列表的序列3所示；

所述微小隐孢子虫GP15基因序列扩增时所用的引物为序列表的序列4-5所示；

所述微小隐孢子虫GP15基因核酸序列为序列表的序列6所示。

2.根据权利要求1所述微小隐孢子虫抗体检测试纸条，样品吸收垫材质为滤血膜；所述胶体金垫材质为玻璃纤维素膜；所述反应膜材质为硝酸纤维素膜；所述吸水垫材质为吸水纸；所述背板为PVC。

3.根据权利要求1所述微小隐孢子虫抗体检测试纸条制备方法，其特征在于步骤2）所述胶体金标记的蛋白A喷涂，喷膜量为1.5μl/cm。

4.根据权利要求1所述微小隐孢子虫抗体检测试纸条制备方法，其特征在于步骤3）所述CP23-GP15溶液与鸡抗蛋白A喷涂，喷膜量为0.8μl/cm。

5.根据权利要求1所述微小隐孢子虫抗体检测试纸条在微小隐孢子虫病检测中的应用。