[发明专利]大肠杆菌YbhF蛋白特异性B细胞抗原表位多肽及其应用

说明书

本发明涉及一种大肠杆菌YbhF蛋白特异性B细胞抗原表位多肽，其氨基酸序列为SEQ NO:1所示。本发明还涉及大肠杆菌YbhF蛋白特异性B细胞抗原表位多肽在制备大肠杆菌单克隆抗体中的应用。本发明的E.coli YbhF蛋白特异性B细胞抗原表位多肽作为抗原能够检测E.coli YbhF蛋白的表达，且抗原纯度更高，可克服基因工程表达抗原纯化中菌体杂蛋白的残留所致的非特异性反应，重链为IgG1亚类、轻链为κ型，具有良好的特异性；所制备的单克隆抗体纯度更高，便于研究YbhFSR转运体中YbhF蛋白的功能，为YbhFSR转运体抑制剂的研发奠定基础。

技术领域

本发明属于分子免疫学领域，涉及大肠杆菌YbhF蛋白特异性B细胞抗原表位多肽及其应用。

背景技术

大肠杆菌(Escherichin coli)在一定的条件下可致人及动物发病，成为致病性大肠杆菌。致病性大肠杆菌为医学和兽医学临床感染中最常见的病原菌之一，给人类健康及畜牧业发展造成了严重危害。大肠杆菌是主要寄生于人和动物消化道的一种条件致病菌，是当今社区感染和医院感染的最重要的条件致病菌，在院内感染病原菌中分离率为第一位，常引起人体各部位如呼吸道、消化道、泌尿生殖道、血液、皮肤等的严重感染；在兽医临床上，由于致病性大肠杆菌的血清型复杂，仅国内报道就有80余种之多，故对E.coli引起的疾病并无理想的疫苗来预防，多采用有效的抗生素进行治疗。近几年由于人们对抗生素大量、持续并且不恰当的使用，导致大肠杆菌耐药株不断增多，耐药机制不断变迁，特别是大肠杆菌多重交叉耐药株的大量出现，使人医临床和兽医临床对大肠杆菌病的治疗变得十分困难，有时甚至找不到可治之药。近年来，大肠杆菌的耐药性问题己经引起了国内外医药界的广泛重视，引起细菌耐药性一个很重要的原因是药物外排泵的存在，而YbhFSR转运体是已经被实验证实的药物外排转运体，目前逆转细菌耐药性主要的手段是研发和筛选药物外排泵的抑制剂，针对YbhFSR转运体抑制剂的研发需要了解该转运体三个基因ybhF、ybhS、ybhR的功能和三个蛋白的作用模式，而YbhF蛋白单克隆抗体的制备是研究YbhF蛋白的基础。

YbhF蛋白是一种大肠杆菌中非常保守的蛋白，由579个氨基酸组成，在大肠杆菌耐药中发挥重要作用。功能研究表明，YbhF蛋白位于YbhFSR转运体内，属于ABC家族，该转运体具有四环素外排转运体，而YbhF蛋白蛋白具有ATP结合结构域，在四环素外排过程中通过水解YbhF蛋白结合ATP释放能量完成四环素的外排，因此YbhF蛋白在该转运体中具有决定性作用。因此对YbhF蛋白B细胞表位单克隆抗体的制备对于研究YbhF的功能乃至验证YbhFSR转运体的功能具有重要意义。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种大肠杆菌YbhF蛋白特异性B细胞抗原表位多肽，解决目前大肠杆菌的耐药性越来越强，而YbhF蛋白所在的转运体YbhFSR是引起大肠杆菌耐药性的重要原因，YbhF蛋白高纯度的大肠杆菌抗体难以制备的问题。

本发明的第二目的是提供上述大肠杆菌YbhF蛋白特异性B细胞抗原表位多肽的用途。

本发明通过以下技术方案来实现：

一、一种大肠杆菌YbhF蛋白特异性B细胞抗原表位多肽，其氨基酸序列为SEQ IDNo:1所示。

利用生物信息学方法预测E.coli YbhF的B细胞抗原表位，其氨基酸序列为SEQ IDNo:1所示(⁶⁵TVIGFDPIKN⁷⁴)。该抗原表位序列在不同大肠杆菌菌株中高度保守。

本发明所述的抗原表位SEQ ID No:1(⁶⁵TVIGFDPIKN⁷⁴)对制备的mAb进行鉴定，重链为IgG1亚类、轻链为κ型，具有良好的特异性。

本发明鉴定的YbhF蛋白B细胞表位用于后续检测鉴定YbhF蛋白、研究其功能以及转运机制提供帮助。