[发明专利]一种螺环化合物的生物样品分析方法

权利要求书

1.一种螺环化合物的生物样品分析方法，其特征在于，该分析方法包括以下步骤：

（1）标准曲线溶液配制

称取10.52 mg螺环化合物对照品，置于100 ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀后配制成0.1052 mg/ml的标准溶液，再次加入乙腈稀释，配制成浓度分别为1-500 ng/mL的标准曲线溶液；

（2）质控溶液配制

称取10.78 mg螺环化合物对照品，置于100 ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀后配制成0.1078 mg/ml的质控溶液，再次加入乙腈稀释，配制成浓度分别为2，40，400ng/mL的质控溶液；

（3）内标溶液配制

称取11.43 mg特非那定对照品，置于100 ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀后配制成0.1143 mg/ml的内标溶液，再次加入乙腈稀释，配制成浓度为100 ng/mL的内标溶液；

（4）生物样品前处理

取生物样品，加入重量：体积比为1g : 6 mL的生理盐水匀浆，取100 μL匀浆后的生物样品至1.5 mL EP管中，加入100μL浓度为100 ng/mL的特非那定内标溶液，混匀，加入350-550μL乙腈沉淀，涡旋1-2分钟混匀，4℃，13000-15000 rpm离心15-20分钟，取200 μL上清液进样；

（5）LC-MS/MS方法检测

所述LC-MS/MS方法的色谱及质谱条件如下：

色谱条件：液相型号为Agilent 1260；色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C8；流动相A相为5mM 乙酸铵水溶液，流动相B相为0.1%甲酸乙腈溶液，A:B=10:90；

质谱条件：API 4000质谱ESI源，负离子，离子喷射电压为5000 V，温度550℃，雾化气压力为55 psi，解簇电压压力为60 psi，气帘气体压力为30 psi，扫描方式为多重反应监测;

通过LC-MS/MS方法检测，基于待测物与内标的峰面积比，通过归一化法得到标准曲线，从而定量得到生物样品中螺环化合物的浓度;

所述螺环化合物具有如下任一通式结构：

，

其中，

R1选自可选地被1-3个R4取代的5-10元芳环基或5-10元杂芳环基；

R2选自氢、C1-3烷基、卤代C1-3烷基或C3-6环烷基，其中，所述的C3-6环烷基可选地被一个或多个选自C1-3烷基和卤代C1-3烷基的基团所取代；

Z选自可选地被1-3个R4取代的5-10元芳环基或5-10元杂芳环基；

R3选自-CO2R5、-CONR5R6、-CONR5SO2R6、-CONR5(CR7)1-4CO2R5、-SO2R5或四唑；

A选自N或CR8；

R4选自卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基或C3-6环烷基；

R5、R6和R7独立地选自氢、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C3-6环烷基或卤代C3-6环烷基；

R8选自氢或羟基。

2.如权利要求1所述螺环化合物的生物样品分析方法，其特征在于，所述生物样品选自受试者的血液或血清样品。