[发明专利]一种尿激酶吸附剂及其制备方法和应用有效
申请号: | 202010656257.8 | 申请日: | 2020-07-09 |
公开(公告)号: | CN111760556B | 公开(公告)日: | 2023-06-30 |
发明(设计)人: | 顾京;李争;刘艳红;丁晶;黄俊杰;熊心磊 | 申请(专利权)人: | 江苏尤里卡生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N9/72 | 分类号: | C12N9/72;B01J20/22;B01J20/30 |
代理公司: | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人: | 尉月丽 |
地址: | 211200 江苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 尿激酶 吸附剂 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种尿激酶吸附剂的制备方法:其特征在于,包括以下步骤:
S1、将硅胶高温活化,得到活化硅胶;
步骤S1中所述高温活化为:在125℃下烘干4h;
S2、将步骤S1得到的活化硅胶和偶联剂在有机溶剂中,回流反应8h,过滤、乙醇提取、水洗,得到前驱体1;
步骤S2中活化硅胶、偶联剂和有机溶剂的用量比例为100g:50mL:400mL;所述偶联剂为乙烯基甲基二乙氧硅烷,所述有机溶剂为甲苯;
S3、步骤S2得到的前驱体1与溴素反应至水溶液刚刚变红,过滤水洗,得到前躯体2;
S4、向步骤S3得到的前驱体2中加入400mL水和20g对氨基苯甲脒盐酸盐,调节pH至9,升温80℃反应8h,降温至30℃、过滤、乙醇提取、水洗、甩干,即得。
2.一种根据权利要求1所述的制备方法制备的尿激酶吸附剂。
3.一种从人尿中直接吸附尿激酶的方法,其特征在于,利用权利要求1所述的制备方法制备的尿激酶吸附剂进行吸附。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将尿激酶吸附剂悬液注入带滤网的吸附柱,打开吸附柱的出水口,水流出吸附柱,尿激酶吸附剂形成吸附柱床;
(2)将步骤(1)得到的吸附柱放置于小便池/斗中,吸附人尿中的尿激酶,取回吸附柱床;
(3)将步骤(2)取回的吸附床柱用纯化水清洗,取出吸附剂;
(4)向步骤(3)得到的吸附剂加入平衡缓冲液,制成悬混液;
(5)将步骤(4)得到的悬混液装入层析柱,用洗脱缓冲液进行洗脱,收集到的洗脱液,即为尿激酶粗品溶液;
(6)将步骤(5)洗脱结束后的层析柱用再生缓冲液清洗,用纯化水冲洗至中性,取出尿激酶吸附剂。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤(1)中所述尿激酶吸附剂悬液中尿激酶吸附剂的质量分数为48-55%;
步骤(4)中所述平衡缓冲液:pH 6.4-7.8,含0.15-0.65M NaCl的0.05-0.15M的Tris-HCl缓冲液;
步骤(5)中所述洗脱缓冲液:pH2.0-3.0,0.05M-0.15M甘氨酸缓冲液;
步骤(6)中所述再生缓冲液为含0.1-0.2M醋酸的体积百分数为10-30%的乙醇水溶液。
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