[发明专利]一种液氮保藏金针菇菌种的降温方法

说明书

本发明涉及一种液氮保藏金针菇菌种的降温方法，属于菌种超低温保存技术领域。解决现有技术中冷冻速率太快或太慢，不利于细胞存活的问题，提供如下技术方案：包括如下步骤：(1)将生化培养箱中20℃培养好的平板种放置在超净工作台内，取平板种接种块于2ml冻存管保护液中；(2)将步骤(1)得到的冻存管菌种平板种放入4℃保藏箱存放24H；(3)将步骤(2)处理后的冻存管菌种平板种进入程序降温仪进行降温，先设定按2℃/min的速度降温至‑30℃,再设定按3℃/min的速度降温至‑80℃，然后置于液氮罐中长期保存。通过设定合适的降温速率保证了液氮保藏菌种活力和特性，结果优于相同的持续继代菌种，子实体品质优良，给予菌种种类收集和菌种资源库建立提供了有效帮助。

技术领域

本发明涉及菌种超低温保存技术领域，特别涉及一种液氮保藏金针菇菌种的降温方法。

背景技术

微生物具有容易变异的特性，继代培养以及扩繁生产培养过程中，培养性状、农艺性状和商品性状等性状下降。菌种保藏方法主要采用控制温度、水活度、氧气和营养等因素的方法，降低或抑制食用菌的生长代谢，从而达到菌种保藏的目的。程序降温液氮冻存管保藏菌种，在冻存过程中液体水转化为冰，细胞代谢停止，同时，冷冻速率太快或太慢，容易导致细胞内水分丧失或形成大冰晶，都不利于细胞存活。

发明内容

本发明提供一种液氮保藏金针菇菌种的降温方法，解决现有技术中冷冻速率太快或太慢，不利于细胞存活的问题，通过设定合适的降温速率保证了液氮保藏菌种活力和特性，结果优于相同的持续继代菌种，子实体品质优良,给予菌种种类收集和菌种资源库建立提供了有效帮助。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种液氮保藏金针菇菌种的降温方法，包括如下步骤：

(1)将生化培养箱中20℃培养好的平板种放置在超净工作台内，取平板种接种块于2ml冻存管保护液中；

(2)将步骤(1)得到的需冻存管菌种平板种放入4℃保藏箱存放24H；

(3)将步骤(2)处理后的冻存管菌种平板种进入程序降温仪进行降温，先设定按2℃/min的速度降温至-30℃,再设定按3℃/min的速度降温至-80℃，然后置于液氮罐中长期保存。

本发明与现有技术的区别在于：

本发明采用4℃条件下预冷处理24H，然后按2℃/min的降温速率逐步降温至-30℃，最后按3℃/min的降温速度逐步降温至-80℃，最大程度避免了细胞受损。六个月取出活化后，从平板种长势上观察菌丝浓度9分，均匀均一性8分，十二个月再取出与6个月取出时菌种状态一致，菌丝形态稳定性10分。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但本发明的保护范围不限于此。实施例中实施例中未详加说明的内容均按本领域的现有技术。

实施例菌种长势描述评分为10分制。

实施例一：

一种液氮保藏金针菇菌种的降温方法，包括如下步骤：

(1)将生化培养箱中20℃培养好的平板种放置在超净工作台内，取平板种接种块于2ml冻存管保护液中；

(2)将步骤(1)得到的冻存管菌种平板种放入20℃培养箱静置2H；

(3)将步骤(2)处理后的冻存管菌种平板种进入程序降温仪进行降温，先设定按1℃/min的速度降温至4℃，再设定按2℃/min的速度降温至-30℃，然后置于液氮罐中长期保存，作用及效果: 6个月取出活化后，从平板种长势上观察菌丝浓度6分，长速8分。

实施例二:

一种液氮保藏金针菇菌种的降温方法，包括如下步骤：