[发明专利]一种ddPCR检测MYD88基因L265P突变的样本处理方法及检测试剂盒在审
| 申请号： | 202010659062.9 | 申请日： | 2020-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN111690749A | 公开（公告）日： | 2020-09-22 |
| 发明（设计）人： | 黄晓强;刘菲菲;欧小华;胡昌明;于世辉 | 申请（专利权）人： | 广州金域医学检验中心有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 广州广典知识产权代理事务所(普通合伙) 44365 | 代理人： | 庹玖玲;万志香 |
| 地址： | 510000 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 ddpcr 检测 myd88 基因 l265p 突变 样本 处理 方法 试剂盒 | ||
1.一种ddPCR检测MYD88基因L265P突变的样本处理方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、提取样本基因组DNA；
S2、微反应液滴制备：(1)配制含有基因组DNA以及以下引物和探针的微反应液：如SEQID NO.1所示的上游引物，如SEQ ID NO.2所示的下游引物，如SEQ ID NO.3所示的针对MYD88基因L265P突变型检测探针，如SEQ ID NO.4所示的针对MYD88基因L265P野生型检测探针；(2)使用步骤(1)获得的微反应液制备微反应液滴。
2.根据权利要求1所述的ddPCR检测MYD88基因L265P突变的样本处理方法，其特征在于，步骤S1还包括使用限制性内切酶HindIII对提取得到的基因组DNA进行酶切。
3.根据权利要求2所述的ddPCR检测MYD88基因L265P突变的样本处理方法，其特征在于，所述酶切体系中限制性内切酶HindIII的浓度为1000～2000units/ml，基因组DNA的浓度为10～16.5ng/ul。
4.根据权利要求3所述的ddPCR检测MYD88基因L265P突变的样本处理方法，其特征在于，所述酶切反应条件为：37±1℃孵育5～10min。
5.根据权利要求1所述的ddPCR检测MYD88基因L265P突变的样本处理方法，其特征在于，步骤S2所述微反应液中上游引物、下游引物、针对MYD88基因L265P突变型检测探针和针对MYD88基因L265P野生型检测探针的摩尔比为(1～2)：(1～2)：(0.5～1)：(0.5～1)。
6.根据权利要求5所述的ddPCR检测MYD88基因L265P突变的样本处理方法，其特征在于，步骤S2所述微反应液中上游引物和下游引物的摩尔比为1:1；针对MYD88基因L265P突变型检测探针和针对MYD88基因L265P野生型检测探针的摩尔比为1:1。
7.根据权利要求1所述的ddPCR检测MYD88基因L265P突变的样本处理方法，其特征在于，步骤S1所述样本为外周血或骨髓。
8.根据权利要求1～7任一项所述的ddPCR检测MYD88基因L265P突变的样本处理方法，其特征在于，还包括以下步骤：S3、ddPCR扩增，得到处理后的样本，所述ddPCR扩增条件如下：95℃10min；35～40个循环：94℃30s，55℃60s；98℃10min。
9.根据权利要求8所述的ddPCR检测MYD88基因L265P突变的样本处理方法，其特征在于，ddPCR扩增时将升温和/或降温速度设置为2±0.5℃/sec。
10.一种ddPCR检测MYD88基因L265P突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含以下引物和探针：如SEQ ID NO.1所示的上游引物，如SEQ ID NO.2所示的下游引物，如SEQ IDNO.3所示的针对MYD88基因L265P位点突变型检测探针，如SEQ ID NO.4所示的针对MYD88基因L265P位点野生型检测探针。
11.根据权利要求10所述的ddPCR检测MYD88基因L265P突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含限制性内切酶HindIII。
12.根据权利要求10～11任一项所述的ddPCR检测MYD88基因L265P突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含基因组DNA提取试剂。
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