[发明专利]一种检测呼吸道病原的核酸的试剂盒、检测方法及应用有效
| 申请号： | 202010659510.5 | 申请日： | 2020-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN111534643B | 公开（公告）日： | 2020-10-09 |
| 发明（设计）人： | 刘佳 | 申请（专利权）人： | 上海科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人： | 王卫彬;黄益澍 |
| 地址： | 201210 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 呼吸道 病原 核酸 试剂盒 方法 应用 | ||
1.一种crRNA和引物对的组合，其特征在于，所述crRNA和引物对为检测呼吸道病原的核酸的crRNA和引物对，所述呼吸道病原为COVID-19病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒；其中，
检测所述COVID-19病毒的ORF1ab基因的crRNA的序列如SEQ ID NO: 32所示；检测所述COVID-19病毒的S基因的crRNA的序列如SEQ ID NO: 34所示；检测所述COVID-19病毒的E基因的crRNA的序列如SEQ ID NO: 38所示；检测所述COVID-19病毒的M基因的crRNA的序列如SEQ ID NO: 43所示；检测所述COVID-19病毒的N基因的crRNA的序列如SEQ ID NO: 48所示；检测所述甲型流感病毒的M基因的crRNA的序列如SEQ ID NO: 51所示；和，检测所述乙型流感病毒的HA基因的crRNA的序列如SEQ ID NO: 56所示；
扩增所述COVID-19病毒的ORF1ab基因的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:58和SEQID NO: 62所示；扩增所述COVID-19病毒的S基因的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO: 66和SEQ ID NO: 70所示；扩增所述COVID-19病毒的E基因的引物对的核苷酸序列如SEQ IDNO: 74和SEQ ID NO: 78所示；扩增所述COVID-19病毒的M基因的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO: 82和SEQ ID NO: 86所示；扩增所述COVID-19病毒的N基因的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO: 90和SEQ ID NO: 94所示；扩增所述甲型流感病毒的M基因的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO: 98和SEQ ID NO: 99所示；扩增所述乙型流感病毒的HA基因的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO: 100和SEQ ID NO: 101所示；
所述crRNA用于CRISPR-Cas检测体系，所述的引物对用于RPA中以扩增所述呼吸道病原的核酸。
2.如权利要求1所述的crRNA和引物对的组合，其特征在于，所述的引物对用于RT-RPA中以扩增所述呼吸道病原的核酸。
3.一种用于检测呼吸道病原的核酸的试剂盒，其特征在于，其包括CRISPR-Cas检测体系，其特征在于，所述CRISPR-Cas检测体系包括：crRNA、引物对、Cas蛋白和核酸探针；其中，所述crRNA和所述引物对如权利要求1或2中所示，所述Cas蛋白为Cas12a。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述CRISPR-Cas检测体系还包括金属离子和/或缓冲液。
5.一种非诊断目的的呼吸道病原的核酸的检测方法，其特征在于，利用如权利要求3或4所述的试剂盒中所述的CRISPR-Cas检测体系检测所述核酸。
6.如权利要求1或2所述的crRNA和引物对的组合在用于非诊断目的的 检测呼吸道病原的核酸、或在制备检测呼吸道病原的核酸的试剂或试剂盒中的应用；其中，所述呼吸道病原为COVID-19病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述检测为使用CRISPR-Cas检测体系和/或RPA进行检测。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述RPA为RT-RPA。
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