[发明专利]一种基于毛细管印迹SERS传感器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种基于毛细管印迹SERS传感器的制备方法，其特征在于，步骤包括：

(1)将表面洁净的玻璃毛细管一端浸泡在含3-氨基丙基三乙氧基硅烷APTES的无水乙醇溶液中，在70℃下氨基化24h后，水浴超声下用无水乙醇3次洗涤其表面未被反应的硅烷，得到氨基化的玻璃毛细管；

(2)在pH 7.5的HEPES缓冲液中加入3mL的超纯水与40μL的HAuCl₄溶液，室温下静止20分钟后，得到粒径在20nm-50nm的金纳米星胶体悬浮液；

(3)将氨基化的玻璃毛细管浸入制备的金纳米星胶体悬浮液中24h后，用超纯水冲洗三次，室温下干燥后即可制得SERS活性的玻璃毛细管；

(4)在10mM Tris-HCl缓冲液中溶解10mg蛋白和2mg多巴胺，然后将SERS活性的玻璃毛细管垂直浸入上述溶液中，在室温下静置聚合6h；最后，用含0.1％w/v十二烷基硫酸钠与3％v/v乙酸的混合溶液洗涤五次，将蛋白酶分子从聚多巴胺PDA层中洗脱，并用超纯水彻底去除残留的乙酸和十二烷基硫酸钠，干燥备用以制得毛细管印迹SERS传感器。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白为胰蛋白酶。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白为胃蛋白酶、牛血清白蛋白或血红蛋白。

4.一种毛细管印迹SERS传感器，其特征在于，如权利要求2所述的制备方法制备得到。

5.一种毛细管印迹SERS传感器，其特征在于，如权利要求3所述的制备方法制备得到。

6.一种如权利要求4或5所述的毛细管印迹SERS传感器的应用，其特征在于，用于检测蛋白。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述检测蛋白的步骤包括：

(1)将如权利要求4所述的毛细管印迹SERS传感器浸入不同浓度的蛋白酶溶液中后，用去离子水洗涤表面后再浸入到拉曼报告分子3,3'-二乙基硫醛三碳菁化碘DTTC的溶液中，在激光强度为100mW、激光波长为780nm的条件下测定各溶液的SERS强度，绘制DTTC SERS强度对蛋白酶浓度的标准曲线；

(2)将如权利要求4所述的毛细管印迹SERS传感器浸入含有一定量的蛋白酶的尿液中后，用去离子水洗涤表面后再浸入到拉曼报告分子DTTC的溶液中，测量SERS强度，依据(1)中获得的标准曲线测定尿液中蛋白酶的含量，计算回收率。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述步骤(1)(2)中毛细管印迹SERS传感器浸入蛋白酶溶液的时间为10min-15min；所述DTTC的浓度为10^-6M-10^-4M；所述毛细管印迹SERS传感器浸入尿液的时间为10min-15min。

9.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述检测蛋白的步骤包括：

(1)将如权利要求4所述的毛细管印迹SERS传感器浸入不同浓度的蛋白酶溶液中后，用去离子水洗涤表面，在10^-4M考马斯亮蓝G250 CBBG溶液中浸泡1min，再浸入到拉曼报告分子DTTC的溶液中，在激光强度为100mW、激光波长为780nm的条件下测定各溶液的SERS强度，绘制DTTC SERS强度对蛋白酶浓度的标准曲线；

(2)将毛细管印迹SERS传感器浸入含有一定量的蛋白酶的尿液中后，用去离子水洗涤表面后再浸入到拉曼报告分子DTTC的溶液中，测量SERS强度，依据(1)中获得的标准曲线测定尿液中蛋白酶的含量，计算回收率。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述步骤(1)(2)中毛细管印迹SERS传感器浸入蛋白酶溶液的时间为10min-15min；所述DTTC的浓度为10^-6M-10^-4M；所述毛细管印迹SERS传感器浸入尿液的时间为10min-15min。