[发明专利]一种美彩按蚊、多斑按蚊和乌头按蚊多重PCR检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种多重PCR同时检测美彩按蚊、多斑按蚊、乌头按蚊的试剂盒。该试剂盒包括美彩按蚊、多斑按蚊、乌头按蚊的特异性引物、10×buffer、dNTPs、MgCl₂、Taq酶、模板DNA、无菌双蒸水，所述美彩按蚊、多斑按蚊、乌头按蚊的特异性引物的序列分别如SEQ ID NO.5－6，SEQ ID NO.13－14，SEQ ID NO.25－26所示。本发明的多重PCR检测试剂盒，可在收到DNA样品后的3小时内给出定性检测结果，节约成本和时间，对人员设备要求低，是一种检测美彩按蚊、多斑按蚊和乌头按蚊的有效工具。

技术领域

本发明涉及一种多重PCR同时检测美彩按蚊、多斑按蚊、乌头按蚊的试剂盒。

背景技术

按蚊(Anopheles)属昆虫纲双翅目蚊科按蚊属，已知约450种及亚种，分为6个亚属，呈世界性分布，主要分布在热带地区。按蚊雌虫吸取人、畜的血，可传播疟原虫、丝虫病等疾病，根据世界卫生组织的报告，2016年全球发生2.16亿例疟疾，44.5万人死于疟疾，受到淋巴丝虫病威胁的人数高达8.93亿，约4000万人被疾病毁容和丧失劳动力。

随着自然条件的变化和国际交通、贸易、旅游业的发展，蚊虫及其携带的病原体可借助交通工具、集装箱、货物、邮件等在国际间传播，使原本局限在一定范围内的虫媒传染病突破国境或自然地理的界限，在全球范围内广泛传播与流行，对输入国的卫生安全造成极大的威胁。因此，蚊类及其传播疾病的监测，对保障口岸地区的卫生安全，预防和控制虫媒传染病传入、传出具有重要意义。

现阶段对按蚊的鉴定，主要依靠形态学鉴定，其结果准确性难以保证，且对于残缺样本和非成虫期的样本，形态学无法鉴定；分子标记的方法耗时长成本高，对人员和设备的要求也较高。多重PCR技术是在一个反应体系中同时扩增多个目标序列，具有用时短、操作简单、准确性高和特异性强的优点。因此，迫切需要建立一种能快速准确鉴定美彩按蚊、多斑按蚊和乌头按蚊的多重PCR检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺点和不足，提供一种用于鉴定美彩按蚊、多斑按蚊和乌头按蚊多重PCR检测试剂盒及制备方法，具有较高的特异性和敏感性，可在较短时间内测出结果，无需测序，大大节约成本。

本发明提供了美彩按蚊、多斑按蚊、乌头按蚊的特异性引物序列，具体如下：

1)美彩按蚊：扩增目的片段66bp

F3：5’-ATCCTGTTCCTGCTCCAT-3’(SEQID NO.5)

R3：5’-CTTCCTCCCTCATTAACTTTAC-3’(SEQID NO.6)

2)多斑按蚊：扩增目的片段135bp

F7：5’-AGAGGAGGATATACCGTTCA-3’(SEQID NO.13)

R7：5’-AGGAGCACCAGATATAGCA-3’(SEQID NO.14)

3)乌头按蚊：扩增目的片段299bp

F13：5’-CATGTGCAATACCAGAAGAA-3’(SEQID NO.25)

R13：5’-AGAATTAGGTCATCCAGGAG-3’(SEQID NO.26)

本发明还提供了一种用于鉴定美彩按蚊、多斑按蚊和乌头按蚊多重PCR检测试剂盒，该试剂盒包括上述3对引物、10×buffer、dNTPs、MgCl₂、Taq酶、模板DNA、无菌双蒸水。

该试剂盒的使用步骤如下：