[发明专利]一种糖核苷酸及其衍生物的制备方法

权利要求书

1.一种糖核苷酸的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：

步骤（1）利用生物酶催化单糖或其衍生物合成糖核苷酸粗产物；

步骤（2）利用离子沉淀法纯化得到糖核苷酸；

所述糖核苷酸的结构为通式Ⅰ：

糖基为单糖或其衍生物脱去一分子羟基后剩余的基团，选自

含氮碱基选自胞嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤或尿嘧啶；

n选自1、2；

所述离子沉淀法选自钡离子选择性沉淀法；

所述步骤（2）包括：将步骤（1）得到的含有糖核苷酸粗产物的混合液加入有机溶剂，蛋白变性沉淀，去除蛋白，然后加入盐溶液，离心，收集上清液，再使用离子交换树脂介质吸附去除杂质，收集上清液，得到糖核苷酸；

所述盐溶液为含有钡离子的溶液；

所述步骤（1）中反应液的pH为7.0-9.0。

2.根据权利要求1所述的一种糖核苷酸的制备方法，其特征在于，所述钡离子溶液为氯化钡溶液；所述钡离子能够与核苷三磷酸、核苷二磷酸形成络合物沉淀。

3.根据权利要求1所述的一种糖核苷酸的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的有机溶剂选自：甲醇、乙醇、丙酮。

4.根据权利要求1所述的一种糖核苷酸的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为乙醇。

5.根据权利要求1所述的一种糖核苷酸的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为冰乙醇。

6.根据权利要求5所述的一种糖核苷酸的制备方法，其特征在于，将所述冰乙醇加入混合液中，4℃下静止10-60 min，蛋白变性沉淀，去除蛋白。

7.根据权利要求1所述的一种糖核苷酸的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中混合液在4-10 ℃下离心，收集上清液。

8.根据权利要求1所述的一种糖核苷酸的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中离子交换树脂介质为强酸型阳离子交换树脂介质。

9.根据权利要求1所述的一种糖核苷酸的制备方法，其特征在于，

所述的糖核苷酸选自：

式Ⅳ中的R₁选自甲基、叠氮取代甲基、三氟取代甲基；

式Ⅴ中的R₂选自甲基、叠氮取代甲基、三氟取代甲基。

10.根据权利要求1或9所述的一种糖核苷酸的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）包括：将单糖或其衍生物、核苷三磷酸配制成溶液，调节pH，然后添加生物酶，反应12-24 h后，终止反应，得到含有糖核苷酸的混合液。

11.根据权利要求1或9所述的一种糖核苷酸的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中的生物酶为激酶、糖核苷酸合成酶、焦磷酸化酶中的一种或两种以上组成的组合物。

12.根据权利要求11所述的一种糖核苷酸的制备方法，其特征在于，所述的激酶选自葡萄糖醛酸激酶（AtGlcAK）、半乳糖激酶（BiGalK）、N-乙酰氨基己糖激酶（BiNahK）、L-岩藻糖激酶/鸟苷二磷酸-岩藻糖焦磷酸化酶（BfFKP）一种或两种以上；所述的糖核苷酸合成酶选自拟南芥UDP-糖焦磷酸化酶（AtUSP）、多杀巴斯德氏菌N-乙酰氨基葡萄糖1-磷酸尿苷转移酶（PmGlmU）、N-乙酰氨基葡萄糖-1-磷酸尿苷转移酶（AGX1）、鸟苷二磷酸-甘露糖焦磷酸化酶（PfManC）、L-岩藻糖激酶/鸟苷-岩藻糖焦磷酸化酶（BfFKP）、胞苷一磷酸-唾液酸合成酶（NmCSS）一种或两种以上；所述的焦磷酸酶选自无机焦磷酸酶。

13.根据权利要求11所述的一种糖核苷酸的制备方法，其特征在于，所述的生物酶的浓度为0.01-2 mg/mL。