[发明专利]一种siRNA序列及其靶标在提高PEDV毒价中的应用

说明书

本发明公开了两个siRNA序列及其靶标基因序列，通过siRNA对Vero‑E6培养细胞内si‑LNC_002015基因的两个靶点进行干扰，使得Vero‑E6培养细胞内PEDV RNA拷贝数和蛋白表达量与对照相比明显升高，毒价提升。

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，具体涉及一种siRNA序列及其靶标在提高PEDV毒价中的应用。

背景技术

猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)是α冠状病毒属中一种可感染猪各年龄段的病毒，能引起猪产生急性、高传染性和破坏性肠道疾病，尤其是1-2周龄仔猪的发病率高达100％，死亡率可高达80％–100％，给包括我国在内的全球养猪业造成严重经济损失，推高肉价，影响人们的生活水平。而有效的PEDV疫苗的使用对于阻断该病毒的传播具有重要意义，Vero细胞系是规模化生产PEDV商业疫苗的理想细胞系，PEDV在Vero细胞复制的滴度高低将直接关系到疫苗生产的成本高低，因此提高Vero细胞中PEDV的增殖滴度对于节省成本、提升经济效益具有重要价值。

病毒复制需要宿主提供大量的物质和能量以完成病毒的生命周期，而宿主LncRNA可以影响病毒复制。研究表明，宿主LncRNA可以参与能量代谢反应途径影响病毒在细胞内复制，又可以作为先天性免疫负调节因子或正调节因子，调节天然免疫途径的抗病毒反应，因此，LncRNA在病毒增殖的调控过程中发挥着十分重要的作用。

但由于LncRNA结构复杂，下游信号通路繁琐，对LncRNA的调节会产生一系列复杂的连锁反应，使得现有技术还未能实现，通过调节Vero细胞的LncRNA来提高PEDV在Vero细胞中的毒价，此构想在本领域还属于空白。

因此，如何找到一种与PEVD毒价有关LncRNA，并提供一种通过调节LncRNA表达量来提高PEDV的毒价是本领域亟待解决的问题。

发明内容

本发明公开了一种siRNA序列及其靶标通过干扰宿主细胞的LncRNA来提高PEDV毒价的应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种LNC_002015基因在提高PEDV毒价中的应用，所述LNC_002015序列如SEQ IDNO5所示；

LNC_002015基因的siRNA序列，其特征在于，包括：

si-LNC_002015_1U：GCAGUUUACAUUAUGGCUA；SEQ ID NO1；

si-LNC_002015_1D：UAGCCAUAAUGUAAACUGC；SEQ ID NO2；

或

si-LNC_002015_3U：CCUGGUAAGAGGCUAGCUU；SEQ ID NO3；

si-LNC_002015_3D：AAGCUAGCCUCUUACCAGG；SEQ ID NO4；

使用时si-LNC_002015_1U、si-LNC_002015_1D、si-LNC_002015_3U和si-LNC_002015_3D序列的3’端添加dTdT修饰；

所述dT为胸腺嘧啶；

小干扰RNA(siRNA)有时称为短干扰RNA或沉默RNA，是一类长度为20-25个碱基对的具有5′-磷酸、3′-羟基和1～2个核苷酸的3′-粘性末端的双链RNA分子小片段，它可以与对应的靶RNA特异结合，从而对特定基因功能的发挥产生具专一性的削弱效应，这种现象使siRNA成为研究基因功能与药物目标的一项重要工具。