[发明专利]一种利用亲和免疫介质纯化蛋黄抗体的方法

权利要求书

1.一种用于纯化特异性蛋黄抗体的亲和免疫介质，其特征在于，所述亲和免疫介质为吸附融合蛋白的硅藻土，所述融合蛋白为将来源于致病菌或病毒的抗原蛋白与核糖体L2蛋白融合得到的；所述核糖体L2蛋白含有如SEQ ID NO.2所示的多肽序列。

2.如权利要求1所述的亲和免疫介质，其特征在于，所述核糖体L2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.一种权利要求1所述的亲和免疫介质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）合成编码核糖体L2蛋白基因序列；（2）将编码来源于致病菌或病毒的抗原蛋白基因与编码核糖体L2蛋白的基因融合后克隆至带有信号肽的分泌型表达载体中，构建重组表达载体；（3）将所述重组表达载体转化表达宿主，并对表达宿主进行培养表达；（4）将培养结束后所得的发酵液离心，取上清液；（5）将所述上清液与硅藻土混合，使得上清液中的融合蛋白吸附在硅藻土上，得到亲和免疫介质；

或者，包括如下步骤：（1）合成编码核糖体L2蛋白基因序列；（2）将编码来源于致病菌或病毒的抗原蛋白基因与编码核糖体L2蛋白的基因融合后克隆至不含信号肽的胞内表达载体中，构建重组表达载体；（3）将所述重组表达载体转化表达宿主，并对表达宿主进行培养表达；（4）培养结束后破碎宿主细胞，将细胞破碎液离心并取上清液；（5）将所述上清液与硅藻土混合，使得上清液中的融合蛋白吸附在硅藻土上，得到亲和免疫介质。

4.一种纯化特异性蛋黄抗体方法，其特征在于，所述方法为：以固定有相应抗原蛋白的权利要求1或2所述的亲和免疫介质为吸附剂，对蛋黄抗体进行纯化。

5.如权利要求4所述的纯化特异性蛋黄抗体方法，其特征在于，将含有抗体的清液与固定有相应抗原蛋白的亲和免疫介质混合，静置并抽离清液后，用去离子水和低离子强度盐溶液进行清洗亲和免疫介质，洗去非特异性吸附杂蛋白，再用1.0 mol/L的盐溶液对亲和免疫介质进行特异性抗体的洗脱，最后经过超滤脱盐得到脱盐后的高纯度特异性抗体。

6.如权利要求4所述的纯化特异性蛋黄抗体方法，其特征在于，所述蛋黄抗体包括尿素酶UerB蛋黄抗体、鞭毛鞘膜蛋白HpaA蛋黄抗体、空泡细胞毒素VacA蛋黄抗体和/或细胞毒素CagA蛋黄抗体。

7.如权利要求5所述的纯化特异性蛋黄抗体方法，其特征在于，所述含有抗体的清液的制备方法为：从经过抗原蛋白免疫蛋鸡所产鸡蛋中分离得到蛋黄，将蛋黄与去离子水或缓冲液混合，静置后，抽取上清液 过滤得到。

8.如权利要求4所述的纯化特异性蛋黄抗体方法，其特征在于，所述抗原蛋白包括来自于幽门螺杆菌的尿素酶UerB、鞭毛鞘膜蛋白HpaA、空泡细胞毒素VacA和/或细胞毒素CagA。

9.权利要求1或2任一所述的亲和免疫 介质或权利要求3所述的制备方法或权利要求4或5所述的纯化特异性 蛋黄抗体的方法在纯化蛋黄抗体中的应用。