[发明专利]一种黑色素瘤的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用

说明书

本发明公开了一种黑色素瘤的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用。该标志物包括序列为SEQ ID NO.1～100所示的蛋白中的至少一种。本发明基于高通量测序方法，只需要采取少量外周血，提取RNA，通过对样本的处理建立免疫图谱文库，再经过高通量测序和TCR数据分析，首先确定黑色素瘤外周血中特征性TCR序列，然后将待测样本测试结果与该特征性TCR序列比对，从而确定是否患有黑色素瘤。本发明能够同时比较巨大数量的黑色素瘤特异性TCR序列，相比单独检测一种或几种标记物，具有更高的特异性和准确性，提高了诊断效率。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种黑色素瘤的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用。

背景技术

黑色素瘤又称恶性黑色素瘤，是一种与骨伤科有关的皮肤肿瘤。良性黑色素瘤又称色素痣，多不引起注意，但黑色素瘤可以一开始即为恶性，通常由交界痣恶变而来。黑色素瘤在我国虽然是少见恶性肿瘤，但病死率高，发病率也在逐年增加。我国黑色素瘤与欧美白种人差异较大，两者在发病机制、生物学行为、组织学形态、治疗方法以及预后等方面差异较大。在亚洲人和其他有色人种中，原发于肢端的黑色素瘤约占50％，常见的原发部位多见于足底、足趾、手指末端及甲下等肢端部位，原发于黏膜，如直肠、肛门、外阴、眼、口鼻咽部位的黑色素瘤约占20％～30％；而对于白种人来说，原发于皮肤的黑色素瘤约占90％，原发部位常见于背部、胸腹部和下肢皮肤；原发于黏膜的黑色素瘤只占1％～5％。

在我国，皮肤黑色素瘤的高危人群主要包括严重的日光晒伤史，皮肤癌病史，肢端皮肤有色素痣、慢性炎症，及其不恰当的处理，如盐腌、切割、针挑、绳勒等。黏膜黑色素瘤的高危因素尚不明确。因此色素瘤高危人群的筛查，有助于早期发现、早期诊断、早期治疗，同时也是提高黑色素瘤疗效的关键，也是社会的迫切需求。

目前针对黑色素瘤的诊断手段主要有：

1.临床症状判断

黑色素瘤好发于皮肤，因此视诊是早期诊断的最简便手段。原发病变、受累部位和区域淋巴结的视诊和触诊是黑色素瘤初步诊断的常用手段。

皮肤黑色素瘤多由痣发展而来，痣的早期恶变症状可总结为以下ABCDE法则：

A、非对称(asymmetry)：色素斑的一半与另一半看起来不对称；B、边缘不规则(border irregularity)：边缘不整或有切迹、锯齿等，不像正常色素痣那样具有光滑的圆形或椭圆形轮廓；C、颜色改变(color variation)：正常色素痣通常为单色，而黑色素瘤主要表现为污浊的黑色，也可有褐、棕、棕黑、蓝、粉、黑甚至白色等多种不同颜色；D、直径(diameter)：色素痣直径＞5～6mm或色素痣明显长大时要注意，黑色素瘤通常比普通痣大，对直径＞1cm的色素痣最好做活检评估；E、隆起(elevation)：一些早期的黑色素瘤，整个瘤体会有轻微的隆起。

ABCDE法则的唯一不足在于它没有将黑色素瘤的发展速度考虑在内，如几周或几个月内发生显著变化的趋势。皮肤镜可以弥补肉眼观察的不足，同时可以检测和对比可疑黑色素瘤的变化，其应用可显著提高黑色素瘤早期诊断的准确度。黑色素瘤进一步发展可出现卫星灶、溃疡、反复不愈、区域淋巴结转移和移行转移。晚期黑色素瘤根据不同的转移部位症状不一，容易转移的部位为肺、肝、骨、脑。眼和直肠来源的黑色素瘤容易发生肝转移。

2.影像学诊断

1)超声检查(Ultrasonography,US)

超声检查因操作简便、灵活直观、无创便携等特点，是临床上最常用的影像学检查方法。黑色素瘤的超声检查主要用于区域淋巴结、皮下结节性质的判定，为临床治疗方法的选择及手术方案的制定提供重要信息。实时超声造影技术可以揭示转移灶的血流动力学改变，特别是帮助鉴别和诊断小的肝转移、淋巴结转移等方面具有优势。

2)X线计算机断层成像(Computed Tomography,CT)