[发明专利]一种乳腺癌的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用

说明书

本发明公开了一种乳腺癌的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用，该标志物包括序列为SEQ ID NO.1～100所示蛋白中的至少一种。本发明基于高通量测序方法，只需要采取少量外周血，提取RNA，通过对样本的处理建立免疫图谱文库，再经过高通量测序和TCR数据分析，首先确定乳腺癌外周血中特征性TCR序列，然后将待测样本测试结果与该特征性TCR序列比对，从而确定是否患有乳腺癌。本发明能够同时比较巨大数量的乳腺癌特异性TCR序列，相比单独检测一种或几种标记物，具有更高的特异性和准确性，提高了诊断效率。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种乳腺癌的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用。

背景技术

乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤，也是成年女性癌症死亡的主要原因之一，其发病率占所有肿瘤的23％，致死率在所有癌症中居第二。据最新资料统计，全世界每年约有208.8万新增乳腺癌患者，死于乳腺癌者约有62.7万人，而近60％乳腺癌新增病例发生在发达国家。在发达国家中，乳腺癌新增病例数约为全部恶性肿瘤的25％，发病率为79.09/10万，在发展中国家，乳腺癌新增病例数约为全部恶性肿瘤的15.89％。虽然欧美国家为乳腺癌高发区，但我国乳腺癌发生率和死亡率呈逐年增长趋势，尤其是农村地区近10年上升趋势明显。

由于乳腺癌的致死原因并非由于原位癌本身生长，而是远处转移，且乳腺癌一旦发生转移，其五年生存期只有23％，因此乳腺癌的早期发现及早期综合治疗是防治乳腺癌的最有效手段。目前，针对乳腺癌的检查方法主要分为自查乳腺、临床体检、影像学方法、生物化学方法、分子生物学方法及细胞学方法六种。

1、自查乳腺

乳腺自检是在月经后1周乳腺最佳受检状态下实施，每月一次的定期检查能够动态观察乳腺的变化。但有资料表明通过这种手段，并不能提高乳腺癌的早期诊断机率和降低病死率，因此也只能作为一种提高防癌意识的方法。

2、临床体检

临床体检是由专职负责筛查的医师全面检查乳房、腋窝及锁骨上下区有无结节、增厚、皮肤异常、乳头内陷、乳头溢液等现象。虽然单用临床体检作筛查以发现早期乳腺癌的比例较低，直接降低乳腺癌死亡率的效果也不大。但乳腺体检提供了一个让妇女接受教育、警惕乳腺癌发生的机会。

3、影像学

1)乳腺X线摄片

乳腺X线摄片检查有钼靶摄片和干板摄片两种，均适用于观察软组织的结构。全球范围内多个人群的临床随机研究资料表明：联合应用X摄片检查，确能降低40岁以上妇女的乳腺癌死亡率。而对于我国国情和乳腺癌的发病特点，我国妇女乳腺密度普遍较高，发病高峰年龄为40～50岁，比西方国家要提前10年左右，这都使钼靶摄片的敏感性和特异性在我国较西方国家低。所以在我国应用钼靶摄片作为乳腺癌筛查的方法仍存在争议。

2)乳腺超声(Ultrasonography,US)

乳腺US是利用超声仪将超声波发射到乳腺获得声象图，根据声象图显示的病灶的大小、形态、轮廓边界、回声类型、回声内部情况及后方衰减情况等来判断病变的性质。但该方法需要依靠超声医师的经验，主观性较强。

3)乳腺核磁共振检查(Magnetic Resonance Imaging,MRI)

乳腺MRI是乳腺影像学检查的一种，对于乳腺的微小病灶、多中心、多病灶的发现以及评价病变范围方面有优势，但由于乳腺MRI设备要求高，价格较高，耗时长，需静脉注射增强剂，因此不易推广，但在临床上可以作为乳腺超声检查以及x线摄影的重要补充。

4、生物化学方法

乳腺癌的生化学标志检查有癌胚抗原、降钙素、含铁蛋白和单克隆抗体等，但常用的是癌胚抗原。

1)癌胚抗原(CEA)