[发明专利]基于限氮培养和植物激素调控的破囊壶菌脂肪酸生产方法

说明书

本发明公开了基于限氮培养和植物激素调控的破囊壶菌脂肪酸生产方法，该方法包括：(1)配制限氮培养基；(2)加入植物激素；(3)将破囊壶菌Aurantiochytrium sp.PKU#SW8 CGMCC No.20069接种到步骤(2)获得的培养基中，培养，离心、水洗、冻干收获生物质，提取脂肪酸。本发明的方法提升破囊壶菌Aurantiochytrium sp.PKU#SW8 CGMCC No.20069的脂肪酸生产效率。本发明的方法具有简单、易操作、低成本等特点，相比于标准的培养条件，改进后的培养条件对脂肪酸特别是多不饱和脂肪酸产量的提升具有明显的效果。

技术领域

本发明涉及海洋生物资源的开发利用及产业化技术领域，特别涉及基于限氮培养和植物激素调控的破囊壶菌脂肪酸生产方法。

背景技术

脂肪酸是维护人体健康的重要营养物质，在能量供应、激素和细胞膜物质的合成以及维生素A、D、E、K的吸收等方面起到重要作用。相比于饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸对人体健康更为有益，其中omega-3、omega-6等多不饱和脂肪酸是降低血液胆固醇水平、维护心血管健康的必需脂肪酸，但人体自身无法合成，必须从食物中直接摄取。Omega-6常见于葵花、大豆、玉米等植物油中，而亚麻籽、大麻籽和深海多脂鱼类则是富含omega-3的主要食物。Omega-3和omega-6都对人体有益，但后者会阻碍前者的利用，因此最好摄入更多的Omega-3。目前，多不饱和脂肪酸已被广泛应用于心血管疾病的预防，成为越来越受欢迎的保健产品。然而，传统的商业来源将无法满足其日益增长的市场需求，因此迫切需要找到生产多不饱和脂肪酸的替代来源。

破囊壶菌是一类广泛分布于海洋的单细胞异养原生生物，已被发现具有高产脂肪酸特别是多不饱和脂肪酸的潜力，被看作是该类天然活性化合物商业化生产的重要替代来源。目前已有不同的方法用于提高破囊壶菌的脂肪酸积累水平，包括针对不同菌株优化其碳源、氮源、温度、溶解氧等发酵参数，但尚未有结合限氮培养和植物激素调控来促进破囊壶菌脂肪酸积累的报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种破囊壶菌菌株Aurantiochytriumsp.PKU#SW8。

本发明的第二个目的是提供基于限氮培养和植物激素调控的破囊壶菌脂肪酸生产方法。

本发明的技术方案概述如下：

破囊壶菌Aurantiochytrium sp.PKU#SW8 CGMCC No.20069，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

基于限氮培养和植物激素调控的破囊壶菌脂肪酸生产方法，包括如下步骤：

(1)配制限氮培养基：15-25g/L葡萄糖，0.2-0.3g/L KH₂PO₄，0.7-0.8g/L蛋白胨，0.4-0.6g/L酵母提取物，30-36g/L海盐，余量为蒸馏水；

(2)向限氮培养基中加入终浓度为8-12mg/L吲哚乙酸、终浓度为4-6mg/L激动素、终浓度为0.1-4mg/L赤霉酸或终浓度为0.5-5mg/L水杨酸；

(3)将权利要求1的破囊壶菌Aurantiochytrium sp.PKU#SW8 CGMCC No.20069接种到步骤(2)获得的培养基中，在25-30℃恒温、140-200rpm恒定转速下连续摇床培养4-6天，离心、水洗、冻干收获生物质，利用酸热法提取脂肪酸。

优选地，限氮培养基为：20g/L葡萄糖，0.25g/L KH₂PO₄，0.75g/L蛋白胨，0.5g/L酵母提取物，33g/L海盐，余量为蒸馏水。

优选地，所述步骤(2)为：向所述限氮培养基中加入终浓度为10mg/L吲哚乙酸、终浓度为5mg/L激动素、终浓度为0.1mg/L赤霉酸或终浓度为1mg/L水杨酸。