[发明专利]一种检测肝癌核心信号分子的PCR检测试剂及其应用

说明书

本发明提供了一种检测肝癌核心信号分子的PCR检测试剂及其应用，本发明所述PCR检测试剂包括检测ADAM17基因、AKT1基因、ANGPT2基因、BAX基因、BCL2基因和BCL2L1基因等相关基因和内参基因等的PCR反应引物。本发明将涉及肝癌核心信号分子集中在一个平板上，通过做一次实时荧光定量PCR反应，反应细胞的生存状态，与人肝癌Huh7、正常肝细胞做对比，探讨肝癌核心信号分子在人肝癌、正常肝细胞中的可能途径，为研究关键蛋白的调控提供最直接的证据；本发明从转录水平快速准确的找到肝癌核心信号分子，为新靶向药物的机制探讨、靶向肝癌抑制剂的开发等提供了有力的工具。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，尤其涉及一种检测肝癌核心信号分子的PCR检测试剂及其应用。

背景技术

肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是居全球第5位的常见肿瘤，并且在肿瘤相关性死亡中排第3位，尤其是在受肝炎病毒影响严重的亚洲和非洲地区。肝癌的治疗方法虽然有多种：如手术治疗、经肝动脉化疗栓塞、局部消融和放疗等,但总体疗效差。我国的肝癌患者多数发生在肝硬化的基础上，多数患者就诊时已为中晚期肝癌，能手术切除的不到20％，适合局部消融患者有限。近年来，随着分子生物学的深入研究和发展，发现许多信号转导通路与肝癌发生发展、增殖转移及预后密切相关。目前基于这些信号转导通路关键分子靶向治疗策略正在迅猛发展。

肝癌的发生呈现为肝细胞损伤、变性、纤维化，进而癌变的多阶段复杂过程。从分子生物学的角度看，肝癌是正常细胞转化为变异的、细胞增殖失控和具有侵袭性的恶性肿瘤细胞，或者是原癌基因激活与抑癌基因异常表达共同作用的最终结果。近年来研究表明，信号转导通路可以通过调控原癌基因和抑癌基因表达，影响细胞增殖周期、肿瘤血管生成、促进细胞凋亡等多个方面在肝癌中发挥作用。故探讨肝癌细胞中细胞信号转导通路分子，明确具体肝癌组织中发挥致癌作用的核心因子对于治疗肝癌具有重要的现实意义。

发明内容

针对现有技术中如何确定肝癌核心信号分子的调控，如何解释该类核心分子在肝癌细胞中的变化，本发明提供了一种检测肝癌核心信号分子的PCR检测试剂及其应用，本发明将涉及肝癌相关的信号分子集中在一个平板上，通过做一次实时荧光定量PCR反应，反应细胞的生存状态，探讨在肝癌细胞系中引起肝癌核心分子变化的可能靶分子与靶途径，为研究肝癌核心信号蛋白的调节提供最直接的证据。

为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：

一种检测肝癌核心信号分子的PCR检测试剂，它包括以下引物：

(1)检测ADAM17基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-TTCACGTTTGCAGTCTCCAA-3'(SEQ ID NO:1)；

5'-GAAGCGATGATCTGCTACCA-3'(SEQ ID NO:2)；

(2)检测AKT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-TCATCGAACGCACCTTCCAT-3'(SEQ ID NO:3)；

5'-GCTTCAGGTACTCAAACTCGT-3'(SEQ ID NO:4)；

(3)检测ANGPT2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-CCCCACTGTTGCTAAAGAAGA-3'(SEQ ID NO:5)；

5'-CATCCTCACGTCGCTGAATA-3'(SEQ ID NO:6)；

(4)检测BAX基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-CCGAGAGGTCTTTTTCCGAG-3'(SEQ ID NO:7)；