[发明专利]ssc-miR-4334-5p用于制备检测口蹄疫感染的试剂盒和治疗口蹄疫的药物

说明书

本发明提出ssc‑miR‑4334‑5p用于制备检测口蹄疫病毒感染的试剂盒和治疗口蹄疫病毒感染的药物。一种检测口蹄疫病毒感染的试剂盒，该试剂盒用于检测ssc‑miR‑4334‑5p的表达水平。试剂盒包含检测ssc‑miR‑4334‑5p的荧光定量PCR引物。荧光定量PCR引物包括碱基序列miR‑4334‑5p‑F：5’‑CCCTGGAGTGACGGGGGTG‑3’。一种治疗口蹄疫病毒感染的药物，该药物包含ssc‑miR‑4334‑5p抑制剂，其包含序列为5’‑CACCCCCGUCACUCCAGGG‑3’的mRNA。本发明的有益效果：本发明通过荧光定量PCR检测FMDV感染后ssc‑miR‑4334‑5p的表达水平，有助于探索用于诊断病毒感染的潜在非编码RNA靶标。本发明首次证实ssc‑miR‑4334‑5p在抑制FMDV中的作用，有助于开发用于抗病毒感染的新型治疗性miRNA药物。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及ssc-miR-4334-5p的应用。

背景技术

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)感染引起的，该病主要发生于牛，绵羊，山羊，猪和其他偶蹄类动物，其特征是在接触感染的动物的蹄部、口腔、鼻子等部位的皮肤上形成水泡，该疫病的爆发会导致严重的经济损失。该病毒被认为是已知的传染性最强的病毒之一。在FMDV感染期间，I型干扰素(IFN)和促炎细胞因子的表达通过核转录因子κB(NF-κB)和IFN调节因子3和7(IRF3/7)激活而上调，从而形成抗病毒状态。

MicroRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为22nt的单链非编码RNA，经Drosha和Dicer剪切产生，主要调控基因的转录后表达过程。真核生物中存在不同类型的miRNA，主要作用是抑制体内不同的生物学过程中合成的不需要的转录物。已有研究报道miRNA直接或间接调节病毒感染。在口蹄疫中，已经报道miR-1307通过促进VP3降解和增强先天免疫反应来抑制FMDV复制。MiR-203a-5p通过调控Sam68抑制FMDV病毒RNA复制。并且已经报道了多种人工设计的靶向病毒3D^pol或核糖体内部进入位点的miRNA可以有效抑制FMDV复制。此外，基于miRNA的丙型肝炎感染治疗已成功完成II期临床试验。目前没有基于ssc-miR-4334-5p相关的可用于FMDV诊断和治疗的miRNA药物。

发明内容

本发明是为了解决目前没有基于ssc-miR-4334-5p相关的FMDV诊断试剂盒和治疗的miRNA药物这一问题而展开的。

本发明的技术方案：一种ssc-miR-4334-5p在制备检测口蹄疫病毒感染的试剂盒中的应用。

一种检测口蹄疫病毒感染的试剂盒，该试剂盒用于检测ssc-miR-4334-5p的表达水平。通过检测ssc-miR-4334-5p的表达水平，与阴性比较，判断是否感染口蹄疫病毒。如果ssc-miR-4334-5p的表达水平显著高于阴性对照(未感染口蹄疫病毒的正常样本数据)，则提示发生口蹄疫病毒感染；反之，则未被感染。本发明中所述的显著是指具有统计学意义的显著性，p0.05。

所述的试剂盒包含检测ssc-miR-4334-5p的荧光定量PCR引物。

所述荧光定量PCR引物包括碱基序列miR-4334-5p-F：5’-CCCTGGAGTGACGGGGGTG-3’。

在荧光定量PCR反应中的核心是引物，本发明针对序列设计了特异性的扩增引物，荧光定量PCR和反转录所需的其他试剂可采用成熟的商品化试剂。内参可采用miR-16-F(序列为：5’-GCAGTAGCAGCACGTA-3’)。

一种治疗口蹄疫病毒感染的药物，该药物包含ssc-miR-4334-5p抑制剂，其包含序列为5’-CACCCCCGUCACUCCAGGG-3’的mRNA。