[发明专利]WAS基因的gRNA及其应用

说明书

本发明提供了WAS基因的gRNA及其应用，所述gRNA的靶序列位于所述WAS基因的2号外显子和7号外显子，包括SEQ ID NO:1或如SEQ ID NO:2所示的核酸序列。本发明的gRNA的靶序列包括WAS基因的2号外显子和7号外显子，通过敲除兔受精卵中的WAS基因，构建的Wiskott‑Aldrich综合征兔模型可以准确模拟人Wiskott‑Aldrich综合征表型，有利于更好地理解Wiskott‑Aldrich综合征致病机理，为发展高效准确的诊断方法并提供更多的有效治疗方案提供重要参考。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及WAS基因的gRNA及其应用，尤其涉及WAS基因的gRNA及其在构建Wiskott-Aldrich综合征兔模型中的应用。

背景技术

Wiskott-Aldrich综合征(Wiskott-Aldrich syndrome，WAS)是一种由WAS基因突变导致的X连锁的隐性遗传病。根据基因突变类型、WAS蛋白表达情况和临床症状，目前临床上将Wiskott-Aldrich综合征分为典型WAS、X-连锁血小板减少症(X-linkedthrombocytopenia，XLT)、间歇性X-连锁血小板减少症(intermittent X-linkedthrombocytopenia，IXLT)和X-连锁粒细胞减少症(X-linked neutrapenia，XLN)。其中典型WAS最为严重，若不及时治疗，患者的中位生存期只有10～15年。

WAS基因特定表达于造血细胞中，其编码的WAS蛋白(WASP)是一种肌动蛋白成核促进因子，功能复杂，涉及很多重要的生物学活动。目前Wiskott-Aldrich综合征的病理机制还不是很清楚，相对较为了解的是WASP缺陷对T细胞具有一定的影响，而对B细胞、自然杀伤细胞和树突细胞等其他免疫细胞的影响还不清楚。此外，WAS患者的血小板异常以及自身免疫疾病方面的成因也不清楚。Wiskott-Aldrich综合征的临床症状非常复杂，有待于建立高效系统的诊断方法。WAS患者尤其是XLT/IXLT患者经常被误诊为特发性血小板减少症(ITP)，不能获得及时有效的治疗；且Wiskott-Aldrich综合征的有效治疗和干预也依赖于Wiskott-Aldrich综合征类别(典型WAS、XLT/IXLT和XLN)的判定。对于典型WAS，目前有效的治疗手段为造血干细胞移植(Ozsahin H,Cavazzana-Calvo M,Notarangelo LD,etal.Long-term outcome following hematopoietic stem-cell transplantation inWiskott-Aldrich syndrome:Collaborative study of the European Society forImmunodeficiencies and European Group for Blood and Marrow Transplantation[J].Blood,2008,111(1):439-745.Catucci M,Castiello MC,Pala F,etal.Autoimmunity in wiskott-Aldrich syndrome:An unsolved enigma[J].FrontImmunol,2012,3:209)，但是需要进行HLA配型，否则成功率很低；干细胞基因治疗策略也在探索过程中(Toru Uchiyama,Marsilio Adriani,G Jayashree Jagadeesh,et al.TheAmerican Society of GeneCell Therapy[J].2012,20(6):1270-1279.)。