[发明专利]猪戊型肝炎基因4型病毒和猪口蹄疫O型病毒中和抗原表位嵌合蛋白及其制备方法与应用在审
| 申请号： | 202010669038.3 | 申请日： | 2020-07-13 |
| 公开（公告）号： | CN111848815A | 公开（公告）日： | 2020-10-30 |
| 发明（设计）人： | 孟继鸿;艾丁 | 申请（专利权）人： | 上海健康医学院 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C07K14/09;C07K14/08;C07K1/22;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/295;A61K39/135;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 褚明伟 |
| 地址： | 201318 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 猪戊型 肝炎 基因 病毒 口蹄疫 中和 抗原 嵌合 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种猪戊型肝炎基因4型病毒和猪口蹄疫O型病毒中和抗原表位的嵌合蛋白，其特征在于，该嵌合蛋白为Seq8-P166、Seq8-P216或Seq8-P222，其中Seq8为口蹄疫O型病毒优势中和抗原表位多肽，P166、P216或P222为戊型肝炎基因4型病毒的融合蛋白，Seq8、Seq8-P166、Seq8-P216和Seq8-P222的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQID NO.8所示。
2.根据权利要求1所述的一种猪戊型肝炎基因4型病毒和猪口蹄疫O型病毒中和抗原表位的嵌合蛋白，其特征在于，表达Seq8、Seq8-P166、Seq8-P216和Seq8-P222蛋白的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7所示。
3.单独口蹄疫O型病毒优势中和抗原表位重组蛋白，其特征在于，该蛋白为Seq8，Seq8的氨基酸序列如SEQ ID NO.2。
4.一种重组质粒，其特征在于，包含如权利要求1所述猪戊型肝炎基因4型病毒和猪口蹄疫O型病毒中和抗原表位的嵌合蛋白的核苷酸序列，或包含如权利要求3所述单独口蹄疫O型病毒优势中和抗原表位重组蛋白的核苷酸序列。
5.根据权利要求4所述重组质粒，其特征在于，所述的重组质粒分别为pET28a/Seq8、pET28a/Seq8-P166、pET28a/Seq8-P216和pET28a/Seq8-P222。
6.一种基因工程菌株，其特征在于，它含有如权利要求4或5所述的重组质粒。
7.根据权利要求6所述基因工程菌株，其特征在于，该基因工程菌株为大肠杆菌BL21菌株。
8.一种如权利要求1所述猪戊型肝炎基因4型病毒和猪口蹄疫O型病毒中和抗原表位嵌合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)PCR扩增获得Seq8、Seq8-P166、Seq8-P216、Seq8-P222的目的基因；
2)构建重组质粒pET28a/Seq8、pET28a/Seq8-P166、pET28a/Seq8-P216、pET28a/Seq8-P222；
3)将重组质粒转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中；
4)将重组工程菌利用异丙基硫代半乳糖苷诱导表达重组蛋白并通过亲和层析法纯化获得目的蛋白。
9.根据权利要求1所述含有猪戊型肝炎基因4型病毒和猪口蹄疫O型病毒中和抗原表位的嵌合蛋白在猪戊型肝炎和猪口蹄疫联合疫苗的应用。
10.如权利要求3所述单独口蹄疫O型病毒优势中和抗原表位重组蛋白在猪戊型肝炎和猪口蹄疫联合疫苗的应用。
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