[发明专利]一种制备硫酸乙酰肝素寡糖的方法

说明书

本发明公开了一种制备硫酸乙酰肝素寡糖的方法，包括以下步骤：向搅拌式过滤装置中加入Tris‑HCL缓冲液、硫酸乙酰肝素、肝素酶I进行第一超滤反应，收集第一反应滤液；对第一反应滤液进行冷冻干燥，获得第一硫酸乙酰肝素寡糖产品。本发明的一种制备硫酸乙酰肝素寡糖的方法将制备反应与超滤相结合，实现制备反应与超滤同时进行，利用这一动态反应方法可以制备系列不同结构的硫酸乙酰肝素寡糖，使得硫酸乙酰肝素寡糖产品中寡糖的结构种类更丰富，为研究肝素/硫酸乙酰肝素（Hep/HS）结构与功能的关系提供重要的样品糖库；并成功解决了Hep/HS酶解过程中生成的硫酸乙酰肝素寡糖难以分离的难题。

技术领域

本发明涉及天然产物制备技术领域，尤其是，本发明涉及一种制备硫酸乙酰肝素寡糖的方法。

背景技术

硫酸乙酰肝素（HS）是线型的且带强电荷，高度硫酸化的糖胺聚糖，广泛存在于生物体的细胞表面和细胞外基质中，它与血管的生成，炎症的发生，病毒入侵和脑组织损伤等疾病都有着密切的关系，在生物体内扮演着重要的生物学与病理生理学角色。对生物体内HS寡糖结构功能的研究在疾病治疗及新糖类药物开发方面都有重要的意义。迄今为止，很少有报道阐述生物体内HS寡糖的结构，因为采用分离手段从生物材料中直接获取组分均一、结构明确的糖链非常困难。因此，制备结构多样的HS寡糖对深入理解HS结构与功能的关系有重要的意义。

据以往的文献报道，HS寡糖的制备多采用酶解法，化学修饰和合成的方法，但制备的寡糖结构种类少、较单一。化学修饰的方法步骤繁多，不易操作，多采用改变溶剂的极性，选择性地脱除肝素长链上不同位置上的硫酸基团，从而获得目标产物。同样化学合成方法存在类似问题，且制备的寡糖结构和生物体内合成的HS寡糖差异较大。酶解方法由于价格昂贵并且酶解过程中生成的HS寡糖难以分离，并且由于肝素酶对底物作用具有的特异性和持续性，导致原材料利用率低，寡糖得率少。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种制备硫酸乙酰肝素寡糖的方法。

为解决上述问题，本发明采用如下技术方案：

一种制备硫酸乙酰肝素寡糖的方法，包括以下步骤：

向搅拌式过滤装置中加入Tris-HCL缓冲液、硫酸乙酰肝素、肝素酶I进行第一超滤反应，收集第一反应滤液；

对所述第一反应滤液进行冷冻干燥，获得第一硫酸乙酰肝素寡糖产品。

优选地，还包括以下步骤：

所述第一超滤反应结束后，向所述搅拌式过滤装置中再次加入Tris-HCL缓冲液、肝素酶I进行第二超滤反应，收集第二反应滤液；

对所述第二反应滤液进行冷冻干燥，获得第二硫酸乙酰肝素寡糖产品。

优选地，还包括以下步骤：

所述第二超滤反应结束后，向所述搅拌式过滤装置中再次加入Tris-HCL缓冲液、肝素酶I进行第三超滤反应，收集第三反应滤液；

对所述第三反应滤液进行冷冻干燥，获得第三硫酸乙酰肝素寡糖产品。

优选地，所述搅拌式过滤装置中超滤膜的孔径为3000 D-10000 D。

优选地，所述第一超滤反应的反应时间为1h~3h，反应温度为36℃~40℃。

优选地，所述第二超滤反应的反应时间为1h~3h，反应温度为36℃~40℃。

优选地，所述第三超滤反应的反应时间为1h~3h，反应温度为36℃~40℃。

优选地，还包括以下步骤：所述第三超滤反应结束后，向所述搅拌式过滤装置中的超滤膜截留部分产物中加入超纯水水洗，收集水洗产物并进行冷冻干燥，获得第四硫酸乙酰肝素寡糖产品。