[发明专利]一种高效液相色谱法测定肥料中的氟喹诺酮类抗生素的方法

说明书

本发明涉及一种高效液相色谱法测定肥料中的氟喹诺酮类抗生素的方法，包括以下步骤：将冻干的肥料样品研磨，水浴中加热后取上层液置于离心管中，超声提取后收集上清液；上清液过微滤膜收集滤液；取吸附颗粒在紫外灯照射下，超声波萃取；吸附颗粒经乙酸甲醇洗脱后，将洗脱液定容储藏，作为待测样品；用高效液相色谱仪器对氟喹诺酮类药物中的标准样品进行定性分析；采用水浴中加热，超声提取，操作步骤简单，成本低廉。采用吸附颗粒处理、乙酸甲醇洗脱后，经过高效液相色谱能够精确的测量肥料中的氟喹诺酮类抗生素。

技术领域

本发明涉及肥料中氟喹诺酮类抗生素测定，尤其涉及一种高效液相色谱法测定肥料中的氟喹诺酮类抗生素的方法。

背景技术

氟喹诺酮类抗生素的抗菌能力强，毒副作用小，目前氟喹诺酮类药物残留的检测方法主要有微生物分析法、分光光度法、荧光光度法和液相色谱紫外/荧光/质谱检测法等方法。上述检测方法中存在操作繁琐、耗时、耗费大量挥发性有机溶剂、灵敏度低、重现性差等缺点。

肥料中残留的氟喹诺酮类抗生素类药物的检测技术对于环境保护、土壤改良十分必要。目前并没有一种能够测定肥料中的氟喹诺酮类抗生素的有效方法。

发明内容

(一)要解决的技术问题

鉴于现有技术的上述缺点、不足，本发明提供一种高效液相色谱法测定肥料中的氟喹诺酮类抗生素的方法，其解决了测定肥料中的氟喹诺酮类抗生素的问题。

(二)技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：

本发明实施例提供一种高效液相色谱法测定肥料中的氟喹诺酮类抗生素的方法，包括以下步骤：

1)将冻干的肥料样品研磨，并过2mm筛后，筛下肥料细粉待用；

2)称取经步骤1)处理的肥料细粉加入去离子水，置于水浴中加热至70～90℃，搅拌时间为10-20min，取上层液置于离心管中，超声提取15-30分钟，4500r/min离心8-15分钟，收集上清液；

3)步骤2)中的上清液过微滤膜收集滤液；

4)取吸附颗粒置于瓶中，加入甲醇和水活化，加入金属盐溶液，水浴加热搅拌，磁铁分离，采用磷酸盐洗去金属离子，加入步骤3)中的滤液；

5)紫外灯照射下，超声波萃取20-25min；

6)所述吸附颗粒经乙酸甲醇洗脱后，将洗脱液定容储藏，作为待测样品；

7)用高效液相色谱仪器对氟喹诺酮类药物中的标准样品进行定性分析；

8)标准曲线制备：制备系列梯度浓度的氟喹诺酮类药物中的多种混合标准品工作液，这些标准品工作液中每种标准品的浓度分别为20、40、80、300、800ng/mL，在与步骤7)相同的色谱条件下进行高效液相色谱测定；以峰面积为纵坐标，每种氟喹诺酮药物的对应的浓度为横坐标建立各氟喹诺酮药物化合物标准曲线；

9)在同上步骤7)色谱条件下，对待测样品中的目标物含量进行高效液相色谱测定，根据保留时间确定目标物种类，根据标准曲线确定其含量。

可选地，高效液相色谱条件为：固定相C18色谱柱。

可选地，所述步骤2)中，水浴加热温度为80℃，搅拌时间为15min，超声提取时间为18min，离心时间为10min。

可选地，所述步骤4)中的吸附颗粒按照如下方法制备：将FeCl₃·6H₂O溶于乙二醇和中搅拌高温加热后去离子水洗涤，惰性气体下干燥10h，得到吸附颗粒备用。

可选地，所述步骤6)中的储藏温度为3-4℃。