[发明专利]抗人脂蛋白相关磷脂酶A2单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了抗Lp‑PLA2单克隆抗体及其应用，所公开的抗Lp‑PLA2单克隆抗体，具有良好的稳定性和特异性，能够作为制备Lp‑PLA2诊断试剂的关键原料，且具有抗脂蛋白和同族蛋白干扰的能力，与脂蛋白结合或与PLA2同族蛋白混合都不会影响检测结果。采用该单克隆抗体可开发出特异性好、准确度高的诊断检测试剂盒，能够成功检测出健康人与心血管疾病患者血清中Lp‑PLA2的区别，特别是在阿尔兹海默症患者血清中存在PLA2同族蛋白干扰的情况下，也能检测出正确结果。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及抗人脂蛋白相关磷脂酶A2单克隆抗体及其应用

背景技术

脂蛋白相关磷脂酶A2(Lipoprotein-associated phospholipaseA2(Lp-PLA2))，是一种炎性细胞分泌的能促使氧化磷脂水解的磷脂酶，是磷脂酶A2(PLA2)超家族中的一员，Lp-PLA2的基本功能是催化多种氧化磷脂Sn-2位上醋键水解，产生游离脂肪酸和溶血磷脂。此外，Lp-PLA2还能水解血小板活化因子等致炎因子。Lp-PLA2的浓度能够反映动脉粥样硬化斑块的形成及严重程度，因此临床上用于预警心血管突发事件，评估冠心病、脑卒中的发生及复发风险。

目前基于Lp-PLA2酶活性的检测试剂盒在临床上得到了广泛应用。但由于Lp-PLA2同家族的其它磷脂酶所具有的酶活性的干扰，以及受检测环境的影响等因素，使得酶法特异性不够高。同时由于酶法方法学的局限性使得酶法的检测灵敏度也不高。基于蛋白浓度测定的检测方法因为基于抗原抗体的特异性相互作用，所以检测特异性更高。但在临床使用对比中发现，基于酶活性的检测方法以及基于蛋白浓度的检测方法所得结果相关性较差。研究表明血液中的Lp-PLA2蛋白主要与富含载脂蛋白(Apo)B的脂蛋白结合。与Lp-PLA2结合的脂蛋白会掩盖Lp-PLA2上的抗体结合表位，直接干扰抗体与Lp-PLA2的特异性结合，从而使得检测结果不能反映Lp-PLA2的真实浓度。

除此以外，对于阿尔兹海默症以及精神分裂症确诊的情况下，会伴随着大脑的氧化应激反应、炎症等状况出现，同时伴随PLA2G3或者PLA2G12A表达量的升高。这两种都是属于磷脂酶A2家族的成员，其升高会带来对Lp-PLA2诊断检测的干扰。并最终导致与酶法的检测结果相关性差。

因此，能够耐受脂蛋白和其他磷脂酶A2家族的蛋白的特异性抗人Lp-PLA2的单克隆抗体，或抗体对，对于开发更精准更简便的心脑血管疾病检测试剂具有重要的应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供对人Lp-PLA2有高亲和力的抗体，该抗体能抗脂蛋白和同家族其他蛋白的干扰。

本发明的目的之一在于提供一种分离的DNA分子，编码所述抗Lp-PLA2人源抗体的重链和/或轻链的可变区或全长氨基酸。

抗人Lp-PLA2单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含：

a)如SEQ ID NO:1所列的重链可变区CDR1；

b)如SEQ ID NO:2所列的重链可变区CDR2；

c)如SEQ ID NO:3所列的重链可变区CDR3；

d)如SEQ ID NO:4所列的轻链可变区CDR1；

e)如SEQ ID NO:5所列的轻链可变区CDR2；

f)如SEQ ID NO:6所列的轻链可变区CDR3；

上述抗人Lp-PLA2单克隆抗体或其抗原结合部分，命名为LP-A

或

a)如SEQ ID NO:7所列的重链可变区CDR1；

b)如SEQ ID NO:8所列的重链可变区CDR2；