[发明专利]键合小分子激动剂的自组装表位疫苗的制备及其应用

说明书

本发明涉及一种键合小分子激动剂的自组装表位疫苗，所述疫苗能够预防或治疗肿瘤或作为抗癌活性制剂的联用制剂。所述的键合小分子激动剂的自组装表位疫苗由水溶性抗原表位肽和疏水性小分子激动剂两部分组成，所述的抗原表位肽和小分子激动剂通过共价键结合形成化合物，再通过表位多肽之间的热力学作用(氢键、范德华力、二级结构)和小分子激动剂间的疏水相互作用和π‑π堆积，在水溶液中自组装成为具有纳米结构的表位疫苗。自组装疫苗的粒径为10～500nm，所述的键合小分子激动剂的自组装表位疫苗中选用的抗原表位为长度为5～20个氨基酸的多肽，与DC细胞上MHC分子有适当的亲和力并能有效地刺激、诱导产生抗原特异性CTLs，具备形成良好的多肽疫苗及DC疫苗的潜力。所述的键合小分子激动剂的自组装表位疫苗具有良好的临床转化及实际应用前景。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，特别涉及一种键合小分子激动剂的自组装表位多肽疫苗及其多表位共组装疫苗的制备和应用。

背景技术

肿瘤免疫治疗的时代已经到来，并将在未来的癌症治疗中发挥关键作用。当前，人们寻找改善肿瘤免疫反应的新型方法的热情仍然有增无减。为此，正在积极寻求能够减少肿瘤环境中的免疫抑制或增强细胞毒性淋巴细胞对肿瘤反应的小分子，这种新的治疗策略可以用作单一疗法或与其他癌症疗法组合以增加和扩大其功效。

模式识别受体的激动剂被用作潜在的免疫疗法或佐剂，这些激动剂分为两大类：核苷酸寡聚化结构域(NOD)样受体(NLR)激动剂和Toll样受体(TLR)激动剂。TLR激动剂在该领域最受关注，目前已知的TLR共有13种，它们在免疫细胞谱中广泛表达，包括DC、B细胞、巨噬细胞、NK细胞和T细胞。TLR可以促进针对肿瘤的T细胞应答，因此其激动剂在免疫肿瘤学中被广泛开发应用。

咪唑喹啉，如咪喹莫特(imiquimod)及其衍生物，是一类典型的TLR7/8激动剂。母体化合物咪喹莫特已被美国FDA批准用于局部治疗基底细胞癌，用于转移性黑色素瘤和局限性膀胱癌的临床试验也在进行中，后者已获得积极的结果。咪喹莫特类似物瑞喹莫德(resiquimod)也被用于局部治疗皮肤T细胞淋巴瘤，并已得到初步阳性结果。

咪唑喹啉衍生物与TLR结合后，可以促进树突状细胞的成熟，诱发树突状细胞分泌多种细胞因子以及表达多种共刺激分子来发挥作用，进而激发细胞介导的先天性免疫反应，调节细胞与体液免疫应答。然而，该领域的主要局限之一是全身施用TLR7/8激动剂后产生的相关严重的潜在毒性，因为它们可引发细胞因子风暴，严重的可以致命，这限制了它们的临床实用性。

为了保证这些药物分子在使用过程中是安全而有效的，并且可以避免全身性激活反应，很显然作用位点是非常重要的。

基于肿瘤抗原某表位的多肽疫苗已成为当今肿瘤免疫治疗的重要研究领域。然而，表位疫苗在体内半衰期短，不易被APC摄取，且难以进入APC胞内MHCI类抗原呈递途径，故不能有效激发Th1、CTL保护性免疫应答，不能满足肿瘤免疫治疗的要求。

如何将肿瘤表位疫苗联合TLR激动剂共同使用，进一步提高抗肿瘤免疫反应，是一项极具挑战性的工作。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种能够预防和治疗肿瘤的键合小分子激动剂的自组装表位多肽疫苗。

本发明所述的键合小分子激动剂的自组装表位疫苗的制备方法为：

(1)通过Fmoc固相合成法构建抗原表位多肽序列；

(2)筛选物理化学性质与表位肽匹配的小分子激动剂；

(3)对小分子激动剂进行双羟基二硫醚的修饰；

(4)将修饰过的小分子激动剂与表位肽共价键合；

(5)将一种或多种键合有小分子激动剂的表位多肽溶解在水溶液中，调整其浓度为1～10mg/ml，通过多肽自组装形成以水溶液为宏观表现形式的表位疫苗。