[发明专利]葡萄牙牡蛎二倍体与香港巨牡蛎三倍体杂交生产异源四倍体的方法

权利要求书

1.葡萄牙牡蛎二倍体与香港巨牡蛎三倍体杂交生产异源四倍体的方法，其特征包括以下几个步骤：

(a)挑选香港巨牡蛎三倍体作为繁殖母本，挑选普通葡萄牙牡蛎二倍体作为繁殖父本，种贝分别放入种贝培育池进行促熟；

(b)香港巨牡蛎种贝促熟至性腺成熟后，取得卵子，并于下一步开始前熟化；解剖促熟后葡萄牙牡蛎二倍体，获得精子，并于下一步开始前激活；

(c)将熟化的卵子与激活的精子混合于水中，所述精子与卵子数量比例为5～10：1，控制受精卵密度保持在≤1万个/毫升；

(d)观察受精卵发育情况，当第一极体出现50％～75％时，迅速加入细胞松弛素B(0.5～1.0mg/L)或6-二甲基氨基嘌呤(15～30mg/L)处理20～30min；

(e)受精卵在药物处理结束后立即清洗并过滤药物，设置孵化密度，放置于黑桶中孵化；当发育至D型幼虫后，筛选幼虫，设置培育密度并放入黑桶培育；待幼虫出现眼点后，投放附着基质。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(a)中，所述繁殖母本为个体大、活力好、无损伤的，所述繁殖父本测量所有个体的全重，截取全重前10％的个体。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(a)中，所述种贝培养池中的生物饵料，为人工培育金藻、角毛藻和扁藻或土池藻水。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(b)中，所述熟化时间为0.5～1h，所述激活时间为10～20min。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(c)中，水温保持在25℃、盐度保持在20。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(e)中，孵化密度保持在1～3个/ml，培育密度保持在0.5～1个/ml。