[发明专利]一种引物组合物及其应用

权利要求书

1.一种引物组合物，包括正向引物和反向引物，其中，所述正向引物的序列如SEQ IDNO:1所示，所述反向引物的序列如SEQ ID NO:2所示。

2.权利要求1所述的引物组合物在鉴定决明及其混伪品中的用途；所述混伪品包括望江南或田菁中的至少一种。

3.一种采用权利要求1的引物组合物鉴定决明及其混伪品的方法，包括以下步骤：

1)提取待测样品的总DNA；

2)采用所述引物组合物，以待测样品的总DNA为模板进行PCR扩增；

3)对扩增产物进行二代测序，分析测序结果，获得扩增产物的基因序列；

4)将步骤3)获得的基因序列与决明及其混伪品的特征序列进行比对，鉴定决明及其混伪品；其中，决明的特征序列如SEQ ID No.3所示，望江南的特征序列如SEQ ID No.4所示，田菁的特征序列如SEQ ID No.5所示。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，PCR扩增体系中包括：

0.1-0.3μmol/L正向引物；0.1-0.3μmol/L反向引物；2-10ng/μL模板DNA；50-150μmol/LdNTPs；0.02-0.03U/μL DNA聚合酶。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)中，PCR扩增的条件包括：

预变性：97-98℃，50-70s；变性：97-98℃，8-12s；退火：54-56℃，13-17s；延伸：67-69℃，25-35s；25-35个循环；完成循环后继续67-69℃延伸4-6分钟。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤3)中，所述分析测序结果采用DADA2软件。

7.一种用于鉴定决明及其混伪品的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括权利要求1所述的引物组合物。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括PCR缓冲液、ddH₂O、DNA聚合酶、dNTPs，及操作说明书。

9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于，所述混伪品包括望江南或田菁中的至少一种。