[发明专利]用于检测牛副流感病毒3型抗体的阻断ELISA试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于检测牛副流感病毒3型抗体的阻断ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括预包被酶标板和酶标记抗体，所述预包被酶标板为采用纯化的山羊副流感病毒3型包被的酶标板，所述酶标记抗体为辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体2E6，所述单克隆抗体2E6由杂交瘤细胞株2E6分泌，所述杂交瘤细胞株2E6于2016年2月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏编号为 CCTCC NO：C201627，分类命名杂交瘤细胞株2E6。

2.根据权利要求1所述的阻断ELISA试剂盒，其特征在于，所述所述试剂盒还包括样品稀释液、显色液、终止液和洗涤液。

3.根据权利要求2所述的阻断ELISA试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液为含有1%牛血清白蛋白（m/v）和0.02%硫柳汞钠（m/v）的0.01mM、pH值为7.4的PBS缓冲液。

4.根据权利要求2所述的阻断ELISA试剂盒，其特征在于，所述洗涤液的溶剂是0.01mM、pH值为7.4的PBS缓冲液，溶质为吐温-20，吐温-20在洗涤液中的体积百分浓度为0.1%。

5.根据权利要求2所述的阻断ELISA试剂盒，其特征在于，所述终止液为2M的硫酸水溶液。

6.根据权利要求1所述的阻断ELISA试剂盒，其特征在于，所述酶标记抗体制备方法如下：

（1）取5 mg辣根过氧化物酶溶于纯水，加入0.2ml、0.1M的NaIO₄溶液，室温反应30分钟；

（2）将5 mg纯化后的单克隆抗体2E6用偶联缓冲液透析过夜；

（3）将步骤（1）所得溶液加入步骤（2）透析后所得抗体溶液中，室温反应2小时；

（4）加入硼氢化钠封闭反应位点；

（5）磷酸盐缓冲液透析过夜，得到酶标记抗体，加入等量甘油保存于-20℃。

7.根据权利要求1所述的阻断ELISA试剂盒，其特征在于，纯化的山羊副流感病毒3型的包被量为1:200～1:600，酶标记抗体的浓度为5.25～42μg/mL。

8.根据权利要求1所述的阻断ELISA试剂盒，其特征在于，包被缓冲液为0.1M、pH值为9.6的CB缓冲液，CB缓冲液由3.2克/L的碳酸钠和5.86克/L的碳酸氢钠组成。

9.权利要求1-8任一项所述的阻断ELISA试剂盒在检测牛副流感病毒3型抗体上的应用。