[发明专利]一种用于杀伤肿瘤的TCR-T细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种用于杀伤肿瘤的TCR‑T细胞，其特征在于，所述TCR‑T细胞为携带有识别肿瘤抗原TCR的T细胞，所述TCR‑T细胞中的TCR来源于以下中的任意一个或多个T细胞：1)在肿瘤中表达TNFRSF18、CXCL13、TNFRSF4、TNFSF8、ENTPD1、ACP5、LAYN、TNFRSF9、CTLA4、CD200、TIGIT这些基因中的一个或多个的CD4T细胞；2)在肿瘤中表达TNFRSF18、CXCL13、CXCR6、GALNT2、ENTPD1、ACP5、HAVCR2、LAYN、TNFRSF9、CTLA4、CD109这些基因中的一个或多个的CD8T细胞。本发明的TCR‑T细胞能够有效应用于治疗肿瘤，特别是免疫治疗。

技术领域

本发明涉及免疫治疗技术领域，特别是涉及一种用于杀伤肿瘤的TCR-T细胞及其制备方法和应用。

背景技术

T细胞通过其表面的T细胞受体(T Cell Receptor，TCR)识别靶细胞表面的组织相融性分子(Human Leukocyte Antigen，HLA)所呈递的抗原，实现对靶细胞的直接攻击和杀伤。传统的识别肿瘤抗原的TCR-T细胞治疗，是针对已知的肿瘤抗原，克隆能够识别这些已知抗原的TCR，并明确其对应的HLA亚型。然后选择该肿瘤抗原和HLA亚型同时表达的患者，制备TCR-T细胞，进行回输治疗。然而，目前已知的肿瘤抗原较少，并且这些抗原只在一小部分患者中表达。加上同时要表达相对应的HLA分子，导致只有非常少的患者能够同时满足这两个要求。大部分患者无法通过这种识别已知肿瘤抗原的TCR-T细胞进行治疗。

在肿瘤细胞中，基因突变所产生的氨基酸序列变异，是肿瘤抗原的主要来源。然而，由于肿瘤的突变是随机的，这些通过随机突变产生的肿瘤抗原，通常是每个患者所特有的。也就是说，在患者中间共享的肿瘤抗原非常少。因此，必须针对每个患者自身所特有的肿瘤抗原建立相应的识别这些肿瘤抗原的TCR-T细胞，才能够实现对大部分患者的有效治疗。

在肿瘤的发生发展过程中，机体内识别肿瘤抗原的T细胞会被肿瘤抗原所激活，并进入到肿瘤组织，在肿瘤中扩增并杀伤肿瘤细胞。因此如果能够从患者的肿瘤中鉴定和分离出识别肿瘤抗原的T细胞，获得其携带的TCR序列，表达到患者的外周血T细胞中，将能够建立来源于患者自身的，即个体化的肿瘤抗原识别TCR-T细胞，用于个体化的肿瘤治疗。

然而，肿瘤与正常组织以及血液之间的淋巴与血液系统是相互连接的，大量不识别肿瘤抗原的T细胞通过血液和淋巴系统的循环进入到肿瘤。因此肿瘤组织中除了识别肿瘤抗原的T细胞，还含有大量来自于旁边组织和血液的不识别肿瘤抗原的T细胞，是一个各种T细胞的混合体。要从这些混合的T细胞中获得能够识别肿瘤抗原的TCR，首先需要通过肿瘤抗原刺激，确定哪些是能够识别肿瘤抗原的T细胞，然后再获得这些T细胞所携带的TCR序列，用于个体化的TCR-T细胞治疗。同时，在明确这些T细胞是否识别肿瘤抗原后，分析这些T细胞的基因表达特征，比较识别肿瘤抗原的T细胞和不识别肿瘤抗原的T细胞之间的分子特征差异，找到识别肿瘤抗原的T细胞所特有的分子标志物，通过这些特异的分子标志物来分离和获取肿瘤中能够识别肿瘤抗原的T细胞，用于后续的治疗。

鉴定一个T细胞是否识别肿瘤抗原是一个过程非常复杂，且技术要求很高的系统工程。首先需要将T细胞从肿瘤组织中分离出来，在体外进行培养。同时还必须将肿瘤组织中的肿瘤抗原鉴定出来，然后在体外用鉴定出来的肿瘤抗原来刺激分离出来的T细胞。能够被肿瘤抗原刺激起来，才能证明是能够识别肿瘤抗原的T细胞。由于整个鉴定的实验流程极为复杂，技术难度也非常高，导致目前仍然无法对一个肿瘤组织中的T细胞进行系统的肿瘤抗原识别鉴定与分析。也使得目前无法从肿瘤组织中快速获得识别肿瘤抗原的T细胞和TCR，用于治疗。

发明内容