[发明专利]一种适合于南部海区常见砗磲种类鉴定的通用单引物、试剂盒和鉴别方法

权利要求书

1.一种适合于我国南部海区常见砗磲科物种无磷砗磲、鳞砗磲、长砗磲、诺瓦砗磲和砗蚝鉴定的引物组，其特征在于，具体如下：

上游引物F1: ATTGTAGAGCATCATTCAGG；

下游引物R1: TCCAACTGTAAATAAACCAAC；

下游引物R2: TAATGGAAATGGGCTACTACG；

下游引物R3: TAAGTGGCCCCTCAACTGAAG；

下游引物R4: CGTGGCATGCCTGACAGA；

下游引物R5: TATCTACGTCTAACCCTACC。

2.一种快速鉴定我国南部海区常见砗磲科物种无磷砗磲、鳞砗磲、长砗磲、诺瓦砗磲和砗蚝的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1所述的引物组和PCR反应试剂。

3.一种快速鉴定我国南部海区常见砗磲科物种无磷砗磲、鳞砗磲、长砗磲、诺瓦砗磲和砗蚝的鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：

提取待测砗磲样品的基因组DNA，用权利要求1所述的引物组进行PCR扩增，得到扩增产物，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，待检样品扩增出144bp条带的，判定为砗蚝；待检样品扩增出212bp条带的，判定为长砗磲；待检样品扩增出285bp条带的，判定为无鳞砗磲；待检样品扩增出367bp条带的，判定为鳞砗磲；待检样品扩增出545bp条带的，判定为诺瓦砗磲。

4. 根据权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于，所述的PCR扩增，其PCR反应体系的总体积为25μL，包含DNA模板50ng，Buffer 10 mM，上游引物F1 0.2mM, 下游引物R1-R2、R4-R5各0.05mM，下游引物R3 0.1mM，dNTP 0.2 mM，Mg²⁺ 2.0 mM，Taq DNA聚合酶 1U，用灭菌水补足25μL。

5.根据权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于，所述的PCR扩增，其PCR反应程序为：94℃预变性2min，94℃变性20s，56℃退火30s，68℃延伸45s，变性至延伸三个步骤重复30次，68℃延伸7min。