[发明专利]一种适合于南部海区常见砗磲种类鉴定的通用单引物、试剂盒和鉴别方法有效
申请号: | 202010675134.9 | 申请日: | 2020-07-14 |
公开(公告)号: | CN111763747B | 公开(公告)日: | 2022-04-29 |
发明(设计)人: | 马海涛;高红梅;喻子牛;张跃环 | 申请(专利权)人: | 中国科学院南海海洋研究所 |
主分类号: | C12Q1/6888 | 分类号: | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
代理公司: | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人: | 刘明星;朱聪聪 |
地址: | 511458 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 适合于 南部 海区 常见 种类 鉴定 通用 引物 试剂盒 鉴别方法 | ||
1.一种适合于我国南部海区常见砗磲科物种无磷砗磲、鳞砗磲、长砗磲、诺瓦砗磲和砗蚝鉴定的引物组,其特征在于,具体如下:
上游引物F1: ATTGTAGAGCATCATTCAGG;
下游引物R1: TCCAACTGTAAATAAACCAAC;
下游引物R2: TAATGGAAATGGGCTACTACG;
下游引物R3: TAAGTGGCCCCTCAACTGAAG;
下游引物R4: CGTGGCATGCCTGACAGA;
下游引物R5: TATCTACGTCTAACCCTACC。
2.一种快速鉴定我国南部海区常见砗磲科物种无磷砗磲、鳞砗磲、长砗磲、诺瓦砗磲和砗蚝的试剂盒,其特征在于,其包括权利要求1所述的引物组和PCR反应试剂。
3.一种快速鉴定我国南部海区常见砗磲科物种无磷砗磲、鳞砗磲、长砗磲、诺瓦砗磲和砗蚝的鉴别方法,其特征在于,包括以下步骤:
提取待测砗磲样品的基因组DNA,用权利要求1所述的引物组进行PCR扩增,得到扩增产物,将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,待检样品扩增出144bp条带的,判定为砗蚝;待检样品扩增出212bp条带的,判定为长砗磲;待检样品扩增出285bp条带的,判定为无鳞砗磲;待检样品扩增出367bp条带的,判定为鳞砗磲;待检样品扩增出545bp条带的,判定为诺瓦砗磲。
4. 根据权利要求3所述的鉴别方法,其特征在于,所述的PCR扩增,其PCR反应体系的总体积为25μL,包含DNA模板50ng,Buffer 10 mM,上游引物F1 0.2mM, 下游引物R1-R2、R4-R5各0.05mM,下游引物R3 0.1mM,dNTP 0.2 mM,Mg2+ 2.0 mM,Taq DNA聚合酶 1U,用灭菌水补足25μL。
5.根据权利要求3所述的鉴别方法,其特征在于,所述的PCR扩增,其PCR反应程序为:94℃预变性2min,94℃变性20s,56℃退火30s,68℃延伸45s,变性至延伸三个步骤重复30次,68℃延伸7min。
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