[发明专利]一种苯磺酸改性树脂提取尿激酶方法

说明书

本发明公开了一种苯磺酸改性树脂提取尿激酶方法，属于分析化学技术领域，解决了尿激酶的分离提取的问题，其包括的步骤为：选取合适孔径、合适粒径树脂；对选取的树脂表面进行表面磺酸化修饰；用苯磺酸改性表面的树脂吸附男性尿液中的尿激酶；经过洗脱得到高纯度的尿激酶；本发明对尿激酶呈现出特异性吸附，本发明选择性好载样量高，本方法提取的尿激酶具有纯度高，提取的尿激酶纯度可以达到95%以上，提取方法简便的特性。

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，具体是涉及一种苯磺酸改性树脂提取尿激酶方法。

背景技术

尿激酶为从健康人尿中分离的，或从人肾组织培养中获得的一种酶蛋白。由分子量分别为33000(LMW-tcu-PA)和54000(HMW-tcu-PA)两部分组成。尿激酶直接作用于内源性纤维蛋白溶解系统，能催化裂解纤溶酶原成纤溶酶，后者不仅能降解纤维蛋白凝块，亦能降解血循环中的纤维蛋白原、凝血因子Ⅴ和凝血因子Ⅷ等，从而发挥溶栓作用。对新形成的血栓起效快、效果好。还能提高血管ADP酶活性，抑制ADP诱导的血小板聚集，预防血栓形成。尿激酶在静脉滴注后，患者体内纤溶酶活性明显提高；停药几小时后，纤溶酶活性恢复原水平。

然而尿激酶的分离提取一直是重中之重，因此，本发明需要提供一种苯磺酸改性树脂提取尿激酶方法，旨在解决尿激酶的分离提取问题。

发明内容

针对现有技术存在尿激酶的分离不足，本发明实施例的目的在于提供一种苯磺酸改性树脂提取尿激酶方法，经过本发明方法提取的尿激酶纯度可以达到95％以上，以解决上述背景技术中的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种苯磺酸改性树脂提取尿激酶方法，包括以下步骤：

步骤1)选取合适孔径、合适粒径树脂；

步骤2)对选取的树脂表面进行表面磺酸化修饰；

步骤3)用苯磺酸改性表面的树脂吸附男性尿液中的尿激酶；

步骤4)经过洗脱得到高纯度的尿激酶。

作为本发明进一步的方案，步骤3)中苯磺酸改性表面的树脂为苯磺酸表面改性的苯乙烯-而乙烯苯共聚物(PS)树脂球，苯磺酸表面改性的苯乙烯-而乙烯苯共聚物(PS)树脂球的制备方法，是将树脂表面进行磺化，得到磺酸化树脂。

作为本发明进一步的方案，所述苯乙烯-而乙烯苯共聚物通过磺酸化得到苯磺酸键合相树脂，其磺酸化所用方法中，磺酸化的磺化试剂是SO₃、浓H₂SO₄、发烟H₂SO₄和ClSO₂OH中的一种或多种。

作为本发明进一步的方案，所述苯磺酸表面改性的树脂球参数，其指标是比表面积为400-800m²/g，树脂粒径范围为38-1000μm。

所述的苯乙烯-二乙烯苯共聚(PS)树脂表面磺酸化，具体步骤如下：

S1、首先将树脂在二氯乙烷中充分溶胀2小时，后将浓度为98％的浓硫酸加入到反应瓶中，回流反应4小时，反应结束后将反应物置于砂芯漏斗中过滤，用水洗涤至中性。

S2、将步骤S1得到的产物投入到已放置好乙醇的反应瓶中，在80℃反应16小时，反应结束后将反应物置于砂芯漏斗中过滤。

S3、将步骤S2得到的产物用同产物质量的二氯乙烷洗涤3次，将树脂用甲醇洗涤后在砂芯漏斗中抽滤，然后将抽滤产物在真空干燥箱中干燥。

表面苯磺酸化树脂，用于提取男性尿液中尿激酶，具体步骤如下：

a)、将表面苯磺酸化树脂置于尿液中吸附尿液24-120小时，使其充分吸附。