[发明专利]一种内切木聚糖酶突变体S06H03及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种内切木聚糖酶突变体S06H03及制备方法和应用。突变体S06H03的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其最适pH为5.0，最适温度为50℃。与野生酶相比，突变内切木聚糖酶S06H03在10.0mM的β‑Mercaptoethanol、Pb(CH₃COO)₂、CoCl₂、ZnSO₄和FeSO₄中的活性、在3.0‑30.0％(w/v)的NaCl中的活性、在5.0‑30.0％(w/v)Na₂SO₄中酶活性得到了改良。本发明的突变内切木聚糖酶S06H03可应用于高盐环境下食品加工和造纸等技术领域。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及蛋白质改造技术，具体为一种内切木聚糖酶突变体S06H03及制备方法和应用。

背景技术

半纤维素广泛存在于绿色植物细胞壁中，是一种丰富的可再生资源。木聚糖是半纤维素中第一大组分，由木糖苷以β-1,4连接而成。内切木聚糖酶可降解木聚糖主链结构，降解产物为木糖和/或低聚木糖。内切木聚糖酶已广泛应用于食品、饲料、造纸、制革、环保及能源等领域(Collins et al.FEMS Microbiol Rev,2005,29:3–23.)。

高盐环境下催化活性高的酶在工业技术领域具有更好的应用性。例如，在食品方面，耐盐的内切木聚糖酶可用于高盐稀态酱油发酵等；在纸浆漂白方面，木聚糖酶用来去除硫酸盐浆中的木质素残基(Walia et al.3Biotech,2017,7:11)。不同应用环境的高浓度盐离子的种类存在差异，高盐稀态酱油发酵中主要存在高浓度NaCl，而纸浆漂白主要存在高浓度Na₂SO₄。因此，开发耐NaCl和Na₂SO₄的木聚糖酶，有利于其在高盐环境下的食品加工和造纸工艺中的应用。

发明内容

本发明目的在于提供一种内切木聚糖酶突变体S06H03，该突变体可应用于高盐环境下食品加工和造纸等技术领域。

本发明具体通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种内切木聚糖酶突变体S06H03，所述的突变体S06H03的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的氨基酸序列SEQ ID NO.1经修饰、缺失或添加一或几个氨基酸获得氨基酸序列，且保持只有90％的同源性的序列也在本发明的保护范围内。

在本发明另一方面，还提供了所述的内切木聚糖酶突变体S06H03的编码基因s06h03，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

与所述的编码基因s06h03编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与SEQ IDNO.2所示的核苷酸序列或其互补序列不同的核苷酸序列也在本发明的保护范围内。

在本发明的另一方面，还提供了包含携带有编码基因序列为SEQ ID NO.2的重组载体。

在本发明的另一方面，还提供了一种内切木聚糖酶突变体基因的工程菌，所述的工程菌含有具有SEQ ID NO.2所示基因的载体。

在本发明的另一方面，还提供了一种内切木聚糖酶突变体S06H03的制备方法，包括以下步骤：

1)将编码基因s06h03和表达载体pEasy-E2相连接，并将连接产物转化大肠杆菌BL21-Gold(DE3)，获得包含编码基因s06h03的重组菌株；

2)培养重组菌株，诱导重组突变内切木聚糖酶表达；

3)回收并纯化所表达的突变内切木聚糖酶S06H03；

4)活性测定。