[发明专利]DNA提取试剂、检测玉米籽粒转基因的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种DNA提取试剂，用于提取玉米籽粒的DNA，其特征在于，所述DNA提取试剂包括：

溶液A；每120mL所述溶液A中包括以下组分：三羟甲基氨基甲烷1～3g、乙二胺四乙酸0.01～0.05g、氯化钠6.5～8.5g、山梨醇2～4g、十六烷基三甲基溴化铵0.8～1.5g、十二烷基硫酸钠2～3g、盐酸600～800μL、β-巯基乙醇0.5～1.5mL、聚乙烯吡咯烷酮0.5～1.5g；

溶液B；所述溶液B包括三氯甲烷和异戊醇；

溶液C；所述溶液C包括无水乙醇和异丙醇；

溶液D；所述溶液D为核糖核酸酶溶液。

2.根据权利要求1所述的一种DNA提取试剂，其特征在于，所述盐酸的浓度为10～12mol/L。

3.根据权利要求1所述的一种DNA提取试剂，其特征在于，所述溶液B中三氯甲烷和异戊醇的体积比为(470～490):(10～30)。

4.根据权利要求1所述的一种DNA提取试剂，其特征在于，所述溶液C中无水乙醇和异丙醇的体积比为(70～90):(10～30)。

5.根据权利要求1所述的一种DNA提取试剂，其特征在于，所述溶液D包括TE缓冲液和核糖核酸酶A；所述溶液D中核糖核酸酶A的浓度为8～12μg/mL。

6.根据权利要求1所述的一种DNA提取试剂，其特征在于，所述玉米籽粒的含水量不高于45％。

7.一种检测玉米籽粒转基因的试剂盒，包括玉米籽粒的标准DNA、内参基因引物对和目标基因引物对，其特征在于，还包括如权利要求1～6中任一项所述的DNA提取试剂。

8.根据权利要求7所述的一种检测玉米籽粒转基因的试剂盒，其特征在于，所述内参基因引物对的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1～2所示。

9.一种利用如权利要求7或8所述试剂盒来检测玉米籽粒转基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：

利用所述DNA提取试剂提取待检测玉米籽粒的DNA，得到DNA模板；

将DNA模板和所述内参基因引物对进行qPCR测试，得到待检测玉米籽粒中内参基因的扩增Ct值；

将DNA模板和所述目标基因引物对进行qPCR测试，得到待检测玉米籽粒中目标基因的扩增Ct值；

计算待检测玉米籽粒中目标基因的扩增Ct值与待检测玉米籽粒中内参基因的扩增Ct值的差值，记为ΔCt_A；

将所述玉米籽粒的标准DNA和所述内参基因引物对进行qPCR测试，得到内参基因的标准扩增Ct值；

将所述玉米籽粒的标准DNA和所述目标基因引物对进行qPCR测试，得到目标基因的标准扩增Ct值；

计算目标基因的标准扩增Ct值与内参基因的标准扩增Ct值的差值，记为ΔCt_B；

根据ΔCt_A和ΔCt_B，判断待检测玉米籽粒中目标转基因成分的含量。

10.根据权利要求9所述的一种检测玉米籽粒转基因的方法，其特征在于，所述利用所述DNA提取试剂提取待检测玉米籽粒的DNA，得到DNA模板的步骤，具体包括：

将待检测玉米籽粒粉碎后，再与溶液A进行混匀，得到混合物；

将混合物与溶液B进行混匀后，再进行离心处理，得到上清液；

将上清液与溶液C进行混匀后，再进行离心处理，得到第一沉淀物；

将第一沉淀物与乙醇水溶液进行混匀后，再进行离心处理，得到第二沉淀物；

将第二沉淀物进行干燥后，再与溶液D置于50～70℃的温度下进行混匀，得到所述DNA模板。