[发明专利]一种鸡骨组织切片的快速制片方法

权利要求书

1.一种鸡骨组织切片的快速制片方法，其特征在于，步骤如下所述：

S1：固定与第一次脱钙：将骨组织周围其它组织清理干净，放入特定的脱钙-固定液A1.5~5小时，水浴锅加热至38~55℃，固定和脱钙同时进行，直至组织用手指按压有弹性；

S2：修块：用LEICA819羽毛刀片将脱钙-固定液A处理过的鸡骨组织沿横切面切成2毫米的小段；

S3：固定与第二次脱钙：将S2处理的2毫米的骨组织进入特定的脱钙-固定液B 3~8小时，水浴锅加热至50~60℃，固定和脱钙同时进行，直至组织完全变软；

S4：沉糖与中和酸：骨组织进入30％蔗糖和5％硫酸钠混合溶液5~12小时，中间换液2~3次直至骨组织沉至容器底部；

S5：包埋与切片：将冰冻切片机预冷至-15℃，先用包埋剂OCT在载物台上形成一个2~3毫米高的一个平台，待OCT凝固之后，取出沉至容器底部的骨组织，用滤纸吸去多余的S4中的混合溶液，将骨组织放入OCT包埋剂中3分钟，取出骨组织，骨组织横切面放置在前面提到的OCT制作的2~3毫米平台的载物台上，再将OCT覆盖在骨组织上，直至凝固后骨组织不露出，将包埋好的骨组织固定至冰冻切片机上，设定10微米，匀速切片；

S6：染色与封片：将切片置于含有磷酸盐缓冲液PB的六孔板中，用PB清洗骨切片6次，每次10分钟，勾线笔将清洗好的骨切片贴至有多聚赖氨酸液滴的防脱载玻片上，吸去多余的多聚赖氨酸，待骨组织切片干时，在骨组织上滴加苏木精直至全部覆盖住骨组织，染色5分钟，冲洗掉多余染料，酸酒精分化1秒，洗去多余的分化液，伊红染色2分钟，冲洗掉多余染料，甘油明胶封片剂封片，30分钟后上镜观察。

2.根据权利要求1所述的一种鸡骨组织切片的快速染色制片方法，它的特征在于：步骤S1中特定的脱钙-固定液A 、步骤S2中特定的脱钙-固定液B 、步骤S4中30％蔗糖和5％硫酸钠混合溶液在使用时它们的体积与骨组织的比均为25~30：1。

3.根据权利要求1所述的一种鸡骨组织切片的快速染色制片方法，它的特征在于：步骤S1中特定的脱钙-固定液A 的配制过程如下：将浓盐酸、冰醋酸、用PB缓冲液配成的4％多聚甲醛溶液按体积比为22~28：2~8：63~76振荡器混合均匀，即可得到特定的脱钙-固定液A 。

4.根据权利要求1所述的一种鸡骨组织切片的快速染色制片方法，它的特征在于：步骤S2中组织的修块方法应为：沿横切面切成2毫米的小段，保证切面平整。

5.根据权利要求1所述的一种鸡骨组织切片的快速染色制片方法，它的特征在于：步骤S3中特定的脱钙-固定液B 它的配制过程如下：将EDTA-Na₂ 、NaOH、用PB缓冲液配成的4％多聚甲醛溶液按质量比为8~15：1~2：85~92磁力搅拌器混合均匀，待完全溶解后HCl调节PH至7.38，即可得到特定的脱钙-固定液B 。

6.根据权利要求1所述的一种鸡骨组织切片的快速染色制片方法，它的特征在于：步骤S4中磷酸缓冲液的PH为7.38。

7.根据权利要求1所述的一种鸡骨组织切片的快速染色制片方法，它的特征在于：步骤S4中30％蔗糖和5％硫酸钠混合溶液，它的配制方法如下：每100ML水按蔗糖、硫酸钠按30：5的质量比配制，加入水后磁力搅拌器混合均匀，即可得30％蔗糖和5％硫酸钠混合溶液。