[发明专利]一种LC-MS法测定植物样本中微量赤霉素的方法

权利要求书

1.一种LC-MS法测定植物样本中微量赤霉素的方法，其特征在于，检测的赤霉素的种类为GA1、GA15、GA20、GA29、GA3、GA34、GA4、GA5、GA51、GA6、GA7、GA9，具体包括以下步骤：

S1，样品预处理：称取液氮研磨得到的植物样本粉末，加入赤霉素的同位素内标液，然后加入提取液提取，得到样本提取液；向样本提取液中加入活化试剂与衍生化试剂进行衍生；衍生结束，经氮吹或冻干后用复溶溶液进行复溶，配制成待测液；所述提取液为含有体积百分比70～100％乙腈的乙腈液；

S2，配制一系列不同浓度的赤霉素混标溶液，并加入赤霉素同位素的内标、活化试剂和衍生试剂进行衍生，衍生结束，经氮吹或冻干后用复溶溶液进行复溶，配制成待测液；步骤S1和S2中所述活化试剂为三乙醇胺，所述衍生化试剂为3-溴丙基三甲基溴化铵；步骤S1中所用三乙醇胺与提取液的体积比为(0.5～5)：100_；步骤S1中所用3-溴丙基三甲基溴化铵与提取液的体积比为(0.5～5)：100；衍生化反应的条件为60～95℃振荡30～90min；所述复溶溶液中含有1～5％甲酸、10～20％乙腈；

S3，高效液相色谱-质谱分析：将步骤S1和S2中的待测液进行上机检测分析；

其中，色谱柱为ACQUITY HSS T3柱，高效液相色谱条件：流动相A为含有体积百分比为0.01～5％的乙酸的乙酸-水溶液，流动相B为含有体积百分比为0.01％～5％的乙酸的乙酸乙腈溶液，采用梯度洗脱方式，柱温为：40℃，高效液相色谱的洗脱程序为：0min，A：95％；6min，A：50％；8min，A：20％；10min，A：20％，12min，A：95％；

质谱条件：正离子模式和MRM模式，质谱条件为：采用ESI源，离子喷雾电压：4000-5500eV，离子源温度：400-550℃，去簇电压:20-100eV，碰撞电压:20-100eV；所述质谱中离子对信息为：

；

S4，根据步骤S2中混标的检测结果得到各标品的线性回归方程，将步骤S1中样品的检测结果代入到线性回归方程中计算得到样本中各赤霉素的含量。

2.根据权利要求1所述的LC-MS法测定植物样本中微量赤霉素的方法，其特征在于，每50mg植物样本粉末添加500～800μL提取液。