[发明专利]植物中类胡萝卜素酯类化合物的液质联用分析方法

权利要求书

1.一种植物中类胡萝卜素酯类化合物的液质联用分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

确定采用LC-MS/MS检测分析的参数条件，色谱条件：采用反相 色谱柱YMC C30柱，规格为2×100mm, 3μm，柱温25℃~30℃，流动相A为含0.1%甲酸、0.01%BHT以及体积比为1:3的甲醇和乙腈的混合溶液，流动相B为含0.01%BHT的甲基叔丁基醚，采用梯度洗脱方式；质谱条件：采用正离子模式和MRM扫描模式；所述梯度洗脱程序为：

0min，流动相A与流动相B的体积比为100:0；

3min，流动相A与流动相B的体积比为100:0；

5min，流动相A与流动相B的体积比为30:70；

8min，流动相A与流动相B的体积比为5:95；

9min，流动相A与流动相B的体积比5:95；

9.01min，流动相A与流动相B的体积比100:0；

10min，流动相A与流动相B的体积比为100:0

制备待测植物样品溶液，包括如下步骤：将柑橘植物样品研磨成粉末，加入提取溶剂，所述提取溶剂为含0.008%~0.012%BHT以及体积比（0.8~1.2）:（0.8~1.2）:（1.8~2.2）的正己烷、丙酮和乙醇的混合溶剂，涡旋提取，离心，收集上清液；将收集的上清液进行浓缩，得浓缩液；采用复溶剂溶解所述浓缩液，即得;

按照所述色谱条件和所述质谱条件上机测试；

根据类胡萝卜素酯类化合物的定性Q1/Q3离子对确定待测植物中是否含有类胡萝卜素酯类化合物，所述定性Q1/Q3离子对的建立方法包括如下步骤：根据已知分子结构的胡萝卜素酯类化合物的碳骨架结构以及其端羟基与脂肪酸的结合形式，推导理论上可形成的类胡萝卜素酯化合物的分子结构及其分子量；对已知胡萝卜素酯类化合物进行LC-MS/MS分析，确定主要裂解碎片信息，计算所述理论上可形成的类胡萝卜素酯化合物的所有理论二级碎片信息，并与母离子组合，推导该检测参数条件下的所有理论Q1/Q3离子对；根据同类型类胡萝卜素酯类化合物的保留时间随着总碳原子数目增加向后移动以及随着总双键数目增加向前移动，推测待测类胡萝卜素酯类化合物的保留时间，并通过类胡萝卜素酯类化合物标准品分析校正，确定所述定性Q1/Q3离子对，确定所述柑橘样本中包括β-隐黄质酯类物质、β-胡萝卜素、紫黄质、八氢番茄红素、β-隐黄质以及α-隐黄质，所述β-隐黄质酯类物质包括β-隐黄质（12:0）、β-隐黄质（14:0）以及β-隐黄质（16:0）。

2.根据权利要求1所述的植物中类胡萝卜素酯类化合物的液质联用分析方法，其特征在于，所述柱温为28℃。

3.根据权利要求1所述的植物中类胡萝卜素酯类化合物的液质联用分析方法，其特征在于，所述质谱条件为： APCI+离子源，离子源温度为345~355℃，气帘气压力为25psi，辅助加热气Gas1压力为55psi，辅助加热气Gas2压力为60psi，碰撞气压力为12psi，MRM监测窗口为120s。

4.根据权利要求1所述的植物中类胡萝卜素酯类化合物的液质联用分析方法，其特征在于，所述复溶剂为含0.008%~0.012%BHT以及体积比（2.8~3.2）:1的甲醇和甲基叔丁基醚的混合溶剂。

5.根据权利要求1所述的植物中类胡萝卜素酯类化合物的液质联用分析方法，其特征在于，所述涡旋提取的工艺条件为：室温下涡旋提取2~3次，每次15-25min。