[发明专利]一种固定化脂肪酶及其制备方法和在生物柴油中的应用

权利要求书

1.一种固定化脂肪酶在制备生物柴油中的应用，其特征在于，将脂肪酶MAS1-H108A与载体固定化，所述脂肪酶MAS1-H108A的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述载体为疏水非极性树脂D5753，其孔径≥200 nm；

以所述固定化脂肪酶为催化剂，原料油与短链醇直接进行反应，原料油与短链醇的摩尔比为1:1-1:8，酶添加量为15-60 U/g底物，反应温度为20-55℃，反应时间4-10 h，制得生物柴油。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，采用物理吸附法制备固定化脂肪酶。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

（1）制备脂肪酶MAS1-H108A酶液；

（2）酶液经过离心、浓缩后，向酶液中加入磷酸盐缓冲液；加入载体，与酶液混合搅拌进行固定化，取出固定化载体，将固定化酶抽滤，使用磷酸盐缓冲液清洗固定化酶至滤液中无蛋白存在，经干燥，即制得固定化脂肪酶。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述酶液按照10,000- 50,000U/g的总酶活/载体的比例添加；所述固定化的时间为6-12 h。

5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述酶液的体积浓缩5-20倍，得到水解酶活为5,000 - 50,000 U/mL的酶液，再加入占酶液体积10-200 % v/v的磷酸盐缓冲液，调节pH为6-9。

6.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述载体还进行如下预处理：将载体依次用乙醇、盐酸、氢氧化钠和缓冲液浸泡，以去除树脂大孔中的气泡和残留物；所述干燥是30-60℃下干燥2-8 h。

7.根据权利要求1或2或3或4所述的应用，其特征在于，所述反应温度为25-50℃；所述短链醇为甲醇、乙醇。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述反应温度35-40℃。