[发明专利]一种软骨脱细胞基质复合支架的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种软骨脱细胞基质复合支架，其特征在于，结构如式Ⅰ所示，

式I

其中， 为天然高分子或其衍生物，为消化后的软骨脱细胞基质；所述天然高分子或其衍生物所占的质量百分含量为25-75%；所述消化后的软骨脱细胞基质的质量百分含量为25-75%；

该复合支架由脱细胞后的软骨细胞外基质与天然高分子或其衍生物所组成；脱细胞方式为物理法、化学法或酶促法，DNA去除率大于95%，GAG保留率大于40%；

所述软骨脱细胞基质复合支架的制备方法包括以下步骤：

1）将医用无菌的天然高分子或其衍生物配制成浓度为10-30mg/mL的水溶液，备用；

2）制备脱细胞基质颗粒，备用；

3）将步骤2）得到的脱细胞基质颗粒加入到含胃蛋白酶的酸性溶液中，充分搅拌48h，得到乳白色液体；

4）将步骤3）得到的乳白色液体与天然高分子材料共混，成胶后进行冷冻干燥，即可制得支架。

2.如权利要求1所述的软骨脱细胞基质复合支架，其特征在于：所述天然高分子或其衍生物为透明质酸、羧甲基壳聚糖、明胶、胶原、海藻酸钠和硫酸软骨素中的任意一种或几种。

3.如权利要求1所述的软骨脱细胞基质复合支架，其特征在于，所述软骨细胞外基质来自兔或猪的关节软骨，粒径为10-50mm。

4.如权利要求1所述的软骨脱细胞基质复合支架，其特征在于，所述脱细胞基质采用含胃蛋白酶的醋酸或盐酸溶液进行消化，胃蛋白酶与脱细胞基质的质量比为1：5-1：10。

5.如权利要求1至4任一所述软骨脱细胞基质复合支架，其特征在于：该软骨脱细胞基质复合支架作为软骨修复材料。

6.一种组织工程三维细胞支架的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

第一步：将权利要求1中制得的脱细胞基质消化液和胶原溶液灭菌后按体积比1~3:1~3混匀，预先调节pH值至5.0~6.0，然后加入细胞悬浮液混匀，调节pH值至7.0~8.0；细胞悬液的加入量为：按照5×10⁶~5×10⁷cells/mL的比例向基于天然材料胶原的天然高分子复合水凝胶混合液中加入细胞悬液；

第二步：将调节pH值后的混合溶液立即注射至生物体内的待修复部位形成水凝胶，得到组织工程三维支架；或者注入模具中，静置成胶，而后将所得水凝胶从模具中取出并浸没于培养基中，置于培养箱中在34~40℃、3%~5%的CO₂的条件下培养至少1天，得到组织工程三维细胞支架，培养期间定期更换培养基。

7.如权利要求6所述的一种组织工程三维细胞支架的制备方法，其特征在于：所述培养基是在DMEM基础培养基的基础上加入青霉素和链霉素混合液、抗坏血酸以及胎牛血清得到，DMEM培养基中青霉素和链霉素混合液的浓度为0.8%~1.2%，抗坏血酸的浓度为0.15%~0.25%，胎牛血清的浓度为8%~12%。