[发明专利]柑橘叶斑驳病毒RT-RPA检测的特异引物、试剂盒和方法有效
申请号: | 202010680187.X | 申请日: | 2020-07-15 |
公开(公告)号: | CN111690777B | 公开(公告)日: | 2023-06-02 |
发明(设计)人: | 宋震;周常勇;段玉;许建建;马志敏;宾羽 | 申请(专利权)人: | 西南大学 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/94 |
代理公司: | 重庆双马智翔专利代理事务所(普通合伙) 50241 | 代理人: | 方洪 |
地址: | 400715*** | 国省代码: | 重庆;50 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 柑橘 叶斑 病毒 rt rpa 检测 特异 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种柑橘叶斑驳病毒RT-RPA检测的方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)提取待测样品RNA;
2)利用提取的样品RNA进行RT-RPA反应,特异引物的核苷酸序列为:
上游引物:5’-ATGAACACTCACGGCGATGAAATTCCCACA-3’,下游引物:5’-GGATCCCCCATTAAATTCCATAAGCCAGTC-3’;
RT-RPA反应条件为:反应温度为40℃,反应时间为30分钟;
3)RT-RPA反应完成后对反应产物进行检测,检测到112bp的条带即表明待测样品是阳性样品。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,RT-RPA反应的反应体系为:10μM的上\下游引物各2μL,样品RNA2μL,RT-RPA扩增反应试剂。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤3)中RT-RPA反应完成后对反应产物进行检测,检测方法为将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析或者核酸测序。
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